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PCR中各種熱啟動酶存在的意義

閱讀:662        發布時間:2023-6-9

各種熱啟動酶存在的意義

市場上熱啟動的酶種類很多,但新手并不了解熱啟動酶存在的意義。
非熱啟動的Taq酶在較低溫度時也有活性:我有一本1992年出版的《PCR基因擴增實驗操作手冊》中提到,酶在70度時的合成速度為60核苷/秒/酶分子,55度時為22,37度時為1.5,22度時為0.25。也就是說此時引物還沒有正常配對(其可能錯誤配對),而酶已經開始合成了,其合成的產物就會成為以后擴增中的非特異模板。

則熱啟動酶只有在95度高溫一段時間后,其酶活動才啟動起來,故名:熱啟動酶。

這也是為什么進行PCR反應加樣時,各種試劑要在低溫下加樣。但是不是在進行PCR反應加樣時維持低溫就不需要熱啟動酶了呢?答案是也不盡然。

一般PCR儀在運行開始后熱蓋加熱過程中,模板溫度是不控制的。由于熱蓋的加熱需要1.5分鐘以上,且熱蓋溫度一般設在105度,必然會引起模塊溫度的上升,一般會到30-35度,環境溫度高時更甚。也就是說設計不完備的儀器也會提高非特異性反應。

有些儀器的熱蓋在開機時就啟動,這樣做有可以廣場燙手且用戶開機后立即啟動PCR程序也會造成非特異性反應。東勝龍811PCR儀的解決辦法是在運行開始后熱蓋加熱過程中迅速將模塊降溫到10度左右。熱蓋溫度到達后啟動程序運行。

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