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細胞凋亡實驗步驟
閱讀：8083 發布時間：2013-4-3
細胞凋亡檢測實驗
細胞凋亡檢測可以：
（1）用于腫瘤細胞和組織在內的不同種類病理標本研究；
（2）應用于臨床診療，新藥研制、生物制品開發、腫瘤放化療、以及從促凋亡角度探索腫瘤的基因治療；
（3）對相關疾病的早期發現、放化療的療效評價具有舉足輕重的地位。
本實驗用1μg/ml 三尖杉酯堿HT在體外誘導培養的HL-60細胞發生凋亡，同時也有少數細胞發生壞死。用Hoechst33342和碘化丙啶（propidium iodide，PI）對細胞進行雙重染色，可以區別凋亡、壞死及正常細胞。
三尖杉酯堿（HT）是我國自行研制的一種對急性粒細胞白血病，急性單核白血病等有良好療效的抗腫瘤藥物。研究表明HT在0.02~5μg/ml范圍內作用2小時，即可誘導HL-60細胞凋亡，并表現出典型的凋亡特征。
細胞膜是一選擇性的生物膜，一般的生物染料如PI等不能穿過質膜。當細胞壞死時，質膜不完整，PI就進入細胞內部，它可嵌入到DNA或RNA中，使壞死細胞著色，凋亡細胞和活細胞不著色。而一些活細胞染料由于為親脂性物質，可跨膜進入活細胞，因而可進行活細胞染色。Hoechst33342是一種活性熒光染料且毒性較弱，它是雙苯并咪唑的一種衍生物。與DNA特異結合（主要結合于A-T）堿基區），顯示凋亡細胞和活細胞。凡是看到有凋亡小體的細胞都是凋亡細胞。
實驗步驟
一、試劑準備
1. 三尖杉酯堿（HT）：300μg/ml；
2. Tris-HCl（pH7.5）：100mmol/L；
3. EDTA緩沖液：5mol/L；
4. 堿性裂解液：0.2mol/L NaOH；
5. 醋酸鈉：3mol/L KAc（pH4.8）；
注意事項
1. 誘導培養HL-60細胞時間要準確；
2. 熒光顯微鏡下觀察細胞時，由于熒光易碎滅，觀察時要盡量快。