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如何在免疫組化中處理弱陽(yáng)性的問(wèn)題

如果陰性對(duì)照沒(méi)有染色而陽(yáng)性對(duì)照標(biāo)本弱陽(yáng)性，除了考慮上述因素外，還應(yīng)考慮：

① 標(biāo)本的固定方式，不當(dāng)?shù)墓潭ǚ绞交蚬潭〞r(shí)溫度過(guò)高，都會(huì)影響到所檢測(cè)的抗原的數(shù)量和質(zhì)量。

② 不適當(dāng)?shù)目乖迯?fù)方式，由于石蠟切片在制作的過(guò)程中固定劑對(duì)抗原的封閉作用，必須用抗原熱修復(fù)或酶消化或兩種同時(shí)使用的抗原雙暴露法，至于使用哪一種方法，應(yīng)參照生產(chǎn)廠家的說(shuō)明，同時(shí)結(jié)合標(biāo)本的具體情況而定。

③ 抗體的稀釋度是否過(guò)高或者孵育的溫度/時(shí)間是否正確。一般試劑生產(chǎn)廠家都會(huì)對(duì)試劑給出一定的使用范圍，但是由于使用者的標(biāo)本來(lái)自各種組織，處理過(guò)程也不盡相同，所以應(yīng)參照使用范圍，對(duì)所使用的一抗進(jìn)行梯度測(cè)試，找出*的使用濃度。

④ 切片上了過(guò)多的沖洗液，當(dāng)抗體加至切片上時(shí)，等于人為地對(duì)抗體進(jìn)行了進(jìn)一步的稀釋。

⑤ 孵育時(shí)切片是否放置水平，否則會(huì)導(dǎo)致抗體流失。

  如果陰性對(duì)照沒(méi)有反應(yīng)，陽(yáng)性對(duì)照反應(yīng)良好，而標(biāo)本弱陽(yáng)性，則可能是由于陽(yáng)性對(duì)照不是同一種組織、或固定方式不同等原因所致。