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技術文章

恒遠福利!十月總結ELISA工作手冊公布

閱讀:2020          發布時間:2014-10-29

    距離十月終結日期沒剩下幾天了,我公司開展了一個ELISA總結討論會。今天將結果分享給大家,上海恒遠生物福利來了!十月總結ELISA工作手冊公布:
·根據實驗設計,選擇和訂購合適的ELISA試劑盒。
·根據實驗目的設計合理的樣品實驗排板,預留標準品,(+)和(-)對照,空白對照位置,樣品位置,所有對照樣品和待測樣品均需要實驗復孔。
·實驗前確認ELISA平臺穩定,儀器設備正常工作,試劑耗材足夠實驗需要。
    

ELISA板包被實驗操作流程
    1.碳酸鹽包被緩沖液:50mM碳酸緩沖液,pH 9.6,4℃保存。稱取Na2CO3 0.15 克,NaHCO3 0.293克,蒸餾水溶解,定容至100 ml。
    2.包被抗原:
·用50mM的碳酸鹽包被緩沖液(pH 9.6)溶解抗原,稀釋抗原濃度為10-20μg/ml,96孔酶標板每孔加入100μl,4℃放置一個晚上。
·第二天棄去包被液后,PBST洗滌3次,直接后續實驗或者冰箱保存。
·包被細胞
  ① 在96孔培養板上接種細胞,2E4 cells/well,37℃放置一個晚上培養。
  ② 第二天用PBS洗滌培養板2-3次。
  ③ 每孔加入125μl 10% Formalin(1:10稀釋),室溫下固定15 min。
  ④ 用滅菌水洗滌培養板3次,晾干后儲藏在2- 8℃備用。 
結果的判定
    嚴格依據試劑盒提供的陽性判定值(CO)進行結果判定。廠商提供試劑的同時,說明書上列出的CO值是建立在一系列科學試驗及統計研究的基礎上,不應隨意更改。定量測定需要制備標準曲線,根據標準曲線計算結果。 
    
室間質量評價(EQA)
    EQA是一種回顧性評價,主要是控制實驗室結果的準確性。其要點是保證同一患者的標本一樣對待室間質評物,必須強調的是EQA結果必須同IQC一并分析,找出原因,改進工作中的不足,同時指導實驗室選擇合適的試劑盒。
    綜上所有內容,我公司技術人員說:ELISA檢測操作步驟復雜,可能會影響測定結果的因素較多,分布在測定操作的各個步驟中,因此必須加強各環節的質量控制,才能得到準確可靠的檢測結果。

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