植物轉基因
1 微束激光打孔法 原生質體在瞬息間的微束激光映射下,可在質膜外表形成平面或物體表面的大小約0.25Pm2左右的孔眼,使DNA分子進入了細胞。
2 電形成空洞法 在瞬息間的高壓直流電電子脈沖的沖擊下,可以使原生質膜的分子疏松,形成短時間之內性的直徑為3~4nl-n的孔眼,但對原生質體生存力影響半大。這時,存在于原生質體四周圍溶液中的外源DNA,就可以經過這種孔眼進入了原生質體,成功實現基因的直接轉移。
3 微注射法 首先制備植物原生質體,游離出細胞,在倒置目鏡和顯微操作器的幫忙下,將目標基因DNA經過微管注射到受體細胞中。
4 花粉管通道法 在植物受粉時將含目標基因的DNA溶液涂于柱頭上,利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道,將外源DNA導入受精卵細胞,共進一步地整合到受體細胞的基因組中,隨著受精卵的發育而變成含轉基因的新個體。該辦法于80時代開始的一段時間由我國學者周光宇提出。我國到現在為止推廣平面或物體表面的大小zui大的轉基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培養出來的。該法的zui大長處是不聽從賴團體培育人工再生植株,技術簡單,不必裝備精致優良的培養箱KLYQ,常理育種辦公者便于掌握。
5 基因槍法 又叫作微彈轟擊法。其基本原理是將外源DNA黏著在細微的金粒或鎢粒外表,而后在高壓的效用下,微粒被高速射入受體細胞或團體,微粒上的外源DNA進入了細胞后,整合到植物染色體上,得以表現,因此成功實現基因的轉化。
6 農桿菌介導轉化法 將外植體放入包括外源基因的農桿菌(Agrobacteriumtume/ociens)菌液中泡在水中,而后轉入共營養物質,再轉入用篩子選營養物質引誘抗性愈傷團體和抗性芽,扎根后的抗性植株移栽至營養缽成長在放置生化培養箱中培養。