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親和沉淀

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將親和反應的高度選擇性、低處理量特性與沉淀操作的大處理量、地選擇性有機結合形成了親和沉淀技術。將配基與可溶性載體偶聯(lián)后形成載體-配基復合物,該復合物與生物分子結合后在一定條件下可以沉淀出來。

配基-載體復合物可以選擇性地與蛋白質(zhì)結合,溶液中的pH值、離子強度及蛋白質(zhì)濃度等條件對親和結合的影響力并不大,只有競爭性的配基會降低產(chǎn)物與原配基的親和結合力,甚至使親和結合發(fā)生逆轉。

引導產(chǎn)生沉淀的方法有:離子交聯(lián);加入帶相反電荷的聚合物;加入帶相反電荷的疏水基團;改變pH值,誘導產(chǎn)生疏水沉淀;溫度誘導產(chǎn)生沉淀。

親和結合:將親和配基加入到含有目的物蛋白質(zhì)的溶液中,調(diào)節(jié)好有關沉淀的條件,使之有利于親和結合。

洗滌:為經(jīng)過處理的粗制液中發(fā)生親和沉淀可能會發(fā)生非特異性結合,尤其是使用帶電的聚合物,離子交換的效應將使其他蛋白質(zhì)共同沉淀,因此在分離目的物之前要洗滌沉淀物。其做法是:加入適當?shù)那逑磩┲匦氯芙獬恋?,再沉淀;或在專一性洗脫之前?清洗沉淀。在上述過程中要始終保持目的蛋白質(zhì)與配基處于親和結合狀態(tài)。

配基-載體復合物與目的蛋白質(zhì)的分離:分離結束之后,要確?;厥漳康牡鞍踪|(zhì)和配基-載體復合物,目的蛋白質(zhì)要達到一定的純度,回收率要高。

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