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大鼠血管內皮生長因子(VEGF)Elisa試劑盒說明書

時間:2011/4/27閱讀:1891
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上海一基實業有限公司是一家集經銷批發、招商代理的有限責任公司,是一家經國家相關部門批準注冊的企業。主要經營ELISA試劑盒、細胞、血清、抗體、生物試劑、培養基、等產品,具體請.
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5、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
6、加酶標工作液:每孔加入酶標工作液50μL,空白對照孔不加。
7、溫育:37水浴鍋或恒溫箱溫育30min
8、洗板:棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復洗板4次(也可用洗板機按說明書操作洗板)。
9、顯色:每孔先加入顯色劑A 50μL,再加入顯色劑B 50μL,平板混勻器混勻30s(或用手輕輕震蕩混勻30s),37避光顯色15min。
10、終止:取出酶標板,每孔加終止液50μL,終止反應(顏色由藍色立轉黃色)。
11、測定:以空白孔調零,在終止后15分鐘內,用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
12、計算:根據標準品的濃度及對應的OD值,計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據樣本的OD值,在回歸方程上計算出對應的樣品濃度,也可以使用各種應用軟件來計算。zui終濃度為實際測定濃度乘以稀釋倍數。
【樣本要求】
1、樣本不能含疊氮鈉(NaN3,因為疊氮鈉(NaN3)是辣根過氧化物酶(HRP)的抑制劑。
2、標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能立即試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融。
3、樣本應充分離心,不得有溶血及顆粒。
【注意事項】
1、實驗嚴格按照說明書的操作進行,實驗結果判定必須以酶標儀讀數為準。
2酶標包被板開封后如未用完,應立即裝入密封袋中加干燥劑保存。
3、建議所有的標準品、樣本和空白對照都做雙份檢測,取平均值,以減小實驗誤差。
4、牢記樣本已經稀釋5倍,計算結果乘以5才是樣本實際濃度。
5、本試劑盒定量范圍為15-480ng/L,超過此范圍,為標準曲線延伸計算所得,不做為準確定量結果,請用特殊稀釋液稀釋后測定準確結果(15-480ng/L范圍內),乘以總稀釋倍數即為樣本zui終濃度。
6、若顯色過淺,可適當延長底物溫育時間。
7、為避免交叉污染,標準品、樣本和空白對照每加一個就要更換一次吸頭;酶標工作液、樣本稀釋液和底物等公共組分,要懸臂加樣,不得碰到微孔;不得重復使用封板膜
8、試劑盒保質期內使用,不同批號的試劑不得混用。
9、底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。
 
【操作程序總結】
 
準備試劑,樣品和標準品
 

 
加入準備好的樣品和標準品,37℃反應30分鐘
 
洗板4次,加入酶標試劑,37℃反應30分鐘
 
洗板4次,加入顯色液A、B,37℃顯色15分鐘
 
加入終止液
 
15分鐘之內讀OD值
 
計算
 

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