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技術文章

elisa試驗中關于培養細胞樣品裂解的方法

閱讀:2010          發布時間:2011-11-1

 

對于培養細胞樣品:
1. 融解RIPA裂解液,混勻。取適當量的裂解液,在使用前數分鐘內加入PMSF,使PMSF的zui終濃度為1mM
2. 對于貼壁細胞:去除培養液,用PBS、生理鹽水或無血清培養液洗一遍如果血清中的蛋白沒有干擾,可以不洗。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用槍吹打數下,使裂解液和細胞充分接觸。通常裂解液接觸細胞1-2秒后,細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞:離心收集細胞,用手指把細胞用力彈散。按照6孔板每孔細胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應沒有明顯的細胞沉淀。如果細胞量較多,必需分裝成50-100萬細胞/管,然后再裂解。
3. 充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續的PAGEWestern和免疫沉淀等操作。
裂解液用量說明:通常6孔板每孔細胞加入150微升裂解液已經足夠,但如果細胞密度非常高可以適當加大裂解液的用量到200微升或250微升。
上海恒遠主營產品/服務:ELISA試劑盒,免疫組化試劑盒,放免試劑盒,標準品,血清,抗體,培養基,細胞,生物試劑,實驗耗材等
服務承諾:
1. 所購產品均質量保證,有任何質量方面的問題,一律免費包換!
2. 試劑盒方面全程提供技術指導,還有免費代測的服務!
3. 本公司出售的任何產品均提供完善的售后服務,客戶有任何疑問,均是一個工作日,給出解決方案!
 
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