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EB染色試劑盒

細胞凋亡溴化乙啶（EB）染色試劑盒

（Cell Apoptosis Ethidium Bromide Detection Kit）

Store at 4℃ for one year

Expire date：

一、試劑盒說明

溴化乙啶（Ethidium Bromide EB）是一種DNA結合性熒光色素，其激發波長510nm。發射波長595 nm。產生桔紅色熒光。EB不具有膜通透性，不能透過活細胞膜，只能染死細胞，因此用EB單染時，正常細胞不著色，早期凋亡細胞呈微弱桔紅光，晚期凋亡細胞桔紅色熒光增強。而死細胞呈強桔紅光。而EB常與吖啶橙合用雙染進行凋亡檢測，與吖啶橙雙染時，正常細胞中EB不能透膜著色，而吖啶橙可透過細胞膜，使細胞呈綠色均勻熒光，細胞圓形均勻；而在凋亡細胞中，細胞皺縮、染色質凝聚、固縮或斷裂，出芽，凋亡小體形成。染上致密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色顆粒；而壞死細胞被EB染成桔紅色，由此熒光顏色和細胞形態可區分出正常細胞、凋亡細胞及壞死細胞。

二、試劑盒組份

組分	KGA216（100 assays）	儲存條件
溴化乙啶 EB染液	500μL	4℃，避光
10×Buffer A	10 mL	4℃

注: 1×Buffer A配制：用前用雙蒸水將10×Buffer A稀釋10倍。

三、試劑盒以外自備儀器和試劑

熒光顯微鏡、低速離心機、微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片、蓋玻片、

四、使用注意事項

EB染液有毒，操作時要戴手套，需避光。

五、操作方法

1. EB單染

（1）收集細胞，1×Buffer A洗一次，加適量的1×Buffer A重懸，調整細胞濃度約為10⁶/mL；

（2）吸取95μL的細胞懸液和5μL的EB染液，輕輕混勻；

（3）室溫避光染色15min后，滴加于載玻片上，加蓋玻片；

（4）熒光顯微鏡，濾光片515nm觀察，計數、拍照。

正常細胞——細胞不被染色；壞死細胞——細胞具桔紅色熒光；

2. 與吖啶橙AO雙染

（1）收集細胞，1×Buffer A洗一次，加適量的1×Buffer A重懸，調節細胞濃度約為10⁶/mL；

（2）吸取90μL的細胞懸液，加入EB染液和吖啶橙染液各5μL，輕輕混勻；

（3）室溫避光染色15min后，滴加于載玻片上，加蓋玻片；

（4）熒光顯微鏡，濾光片515nm觀察，計數、拍照。

正常細胞——細胞均勻染成綠色熒光；

壞死細胞——細胞桔黃色熒光；

凋亡細胞——染色質濃縮，細胞核碎裂，被染成大小不一、致密濃染的黃綠色顆?；蛞姲|芽狀突起。

（5）計算細胞凋亡率和死亡率

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