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吖啶橙（Acridine Orange，AO）是一種熒光色素，其檢測激發(fā)濾光片波長488nm。阻斷濾光片波長515nm。它與細(xì)胞中DNA和RNA結(jié)合量存在差別，可發(fā)出不同顏色的熒光，與DNA結(jié)合量少發(fā)綠色熒光，與RNA結(jié)合量多發(fā)桔黃色或桔紅色熒光。該染料具有膜通透性，能透過細(xì)胞膜，使核DNA和RNA染色。因此，在熒光顯微鏡下觀察，吖啶橙可透過正常細(xì)胞膜，使細(xì)胞核呈綠色或黃綠色均勻熒光；而在凋亡細(xì)胞中，因染色質(zhì)固縮或斷裂為大小不等的片斷，形成凋亡小體。吖啶橙使其染上致密濃染的黃綠色熒光，或黃綠色碎片顆粒；而壞死細(xì)胞黃熒光減弱甚至消失。吖啶橙AO常與溴化乙啶EB合用雙染，因EB只染死細(xì)胞使之產(chǎn)生桔黃色熒光，由此可區(qū)分出正常細(xì)胞、凋亡細(xì)胞及壞死細(xì)胞。

二、試劑盒組份

組分	KGA213（100 assays）	儲存條件
吖啶橙染液	500μL	4℃，避光
10×Buffer A	10 mL	4℃

注: 1×Buffer A配制：用前用雙蒸水將10×Buffer A稀釋10倍。

三、試劑盒以外自備儀器和試劑

熒光顯微鏡、低速離心機(jī)、微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片、蓋玻片

四、使用注意事項(xiàng)

吖啶橙染液有毒，操作時請戴手套。

五、操作方法

1．吖啶橙單染

（1）收集細(xì)胞，1×Buffer A洗一次，加適量的1×Buffer A重懸，調(diào)節(jié)細(xì)胞濃度約為10⁶/mL；

（2）吸取95μL的細(xì)胞懸液和5μL的吖啶橙染液，輕輕混勻；

（3）室溫避光染色15min后，滴加于載玻片上，加蓋玻片；

（4）熒光顯微鏡，激發(fā)濾光片波長488nm。阻斷濾光片波長515nm觀察，計(jì)數(shù)、拍照。

正常細(xì)胞——細(xì)胞被均勻染成黃綠色熒光；凋亡細(xì)胞——染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核碎裂成點(diǎn)狀，被染成大小不一、致密濃染的綠色顆粒

2．與EB雙染

（1）收集細(xì)胞，1×Buffer A洗一次，加適量的1×Buffer A重懸，調(diào)整細(xì)胞濃度約為10⁶/mL；

（2）吸取90μL的細(xì)胞懸液，加入EB染液和吖啶橙染液各5μL，輕輕混勻；

（3）室溫避光染色15min后，滴加于載玻片上，加蓋玻片；

（4）熒光顯微鏡，濾光片515nm觀察，計(jì)數(shù)、拍照。

正常細(xì)胞——細(xì)胞被均勻染成綠色熒光；壞死細(xì)胞——細(xì)胞桔黃色熒光；

凋亡細(xì)胞——染色質(zhì)濃縮，細(xì)胞核碎裂，被染成大小不一、致密濃染的黃綠色顆粒或見胞質(zhì)芽狀突起。

（5）計(jì)算細(xì)胞凋亡率和死亡率

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