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細胞凋亡形態學檢測試劑盒
  • 細胞凋亡形態學檢測試劑盒
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貨物所在地:江蘇南京市

更新時間:2025-06-24 21:00:07

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細胞凋亡形態學檢測試劑盒

 凋亡細胞形態學檢測試劑盒(光學顯微鏡)
(Apoptotic/Necrotic Cell Detection Kit)
Cat numberKGA               For Research Use Only
Store atRT for one year
Expire date

一、試劑盒說明
形態學檢測是研究細胞凋亡的zui基本方法。細胞凋亡的形態學變化是多階段的,起初,細胞間連接和微絨毛消失,細胞體積縮小,胞漿凝縮,內質網變疏松并與胞膜融合,形成一個個空泡,核糖體與線粒體等細胞器聚集,結構尚無明顯改變,細胞核內的染色質逐漸凝聚成新月狀附在核膜周邊,細胞核固縮呈均一的致密物,進而斷裂成碎塊,此時細胞膜仍保持完整:然后,胞膜及核膜不斷出芽、脫落,一個細胞變成數個大小不等的有膜包裹的凋亡小體:zui后凋亡小體被周圍具有吞噬能力的細胞吞噬、消化。上述這些形態學的變化,可以通過本試劑盒中的染色及光學顯微鏡觀察。
二、試劑盒組份
組份
KGA220100 assays
儲存條件
Dye Reagent 1
10mL
室溫,避光
Dye Reagent 2
1mL
室溫,避光
Buffer A
10mL
室溫
注:Dye Reagent 2使用前,用Buffer A稀釋10倍后染色
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
光學顯微鏡、低速離心機、微量移液器、1.5m L Microtube、載玻片、蓋玻片、甲醇、體積分數為1%鹽酸的80%乙醇、無水乙醇、二甲苯、封片樹脂
四、使用注意事項
利用血球計數板進行該項操作時,不要用血計板配套的質地較硬的蓋玻片,而用普通的蓋玻片反而更利于結果的觀察。
五、操作方法
1.   用適當的方法誘導細胞凋亡,消化收集細胞;
2.   PBS洗滌細胞二次,并調成濃度為1×106cells/ml細胞懸液;
3.   吸取50~100μL的細胞懸液均勻涂布于載玻片(A片)上或用離心涂片機制片,室溫晾干,甲醇固定5 min
4.   A片上滴加數滴100μLDyes Reagent 1室溫染色1 min,用水輕輕洗去染液;
5.   在含體積分數為1%鹽酸的80%乙醇中分化10 S,流水沖洗1 min,晾干,顯微鏡下觀察細胞的形態。
6.   在另一張涂有細胞并已于無水乙醇固定2min的載玻片(B片)上滴加100μL染色液2   Dyes Reagent 2 Buffer A=1:9的混合液),室溫染色520min,用水輕輕洗去染液,室溫晾干;
7.   二甲苯浸泡3 min,以去除雜質,使載玻片透明,zui后樹脂封片,顯微鏡下觀察細胞形態;
8.   觀察200-500個細胞,計數凋亡細胞所占的比例。
結果分析:
A片:凋亡細胞皺縮,胞膜完整。染色質凝聚,嗜堿性增強,染成深藍色,呈環狀或新月狀附在核膜周圍,或細胞核固縮碎裂成數個圓形顆粒,核膜消失。而壞死細胞體積增大,染色質變稀疏成網狀,嗜堿性減低,染成淡藍色,胞核破碎,細胞膜不完整。
B片:凋亡細胞皺縮,胞膜完整。胞漿稀少或缺乏,染成淡紅色,染色質凝聚,染成深紫色,細胞核固縮碎裂成數個圓形顆粒。
計算細胞凋亡率和死亡率:
細胞凋亡率=凋亡細胞/細胞總數×*
細胞死亡率=壞死細胞/細胞總數×*

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