凱基細胞凋亡DNA Ladder檢測試劑盒
（ApotosisDNA Ladder Detection Kit）
Cat number：KGA For Research Use Only
Store at-20℃ for one year
Expire date：
一、試劑盒說明
細胞核染色質DNA斷裂是細胞凋亡的標志特征。在細胞發生凋亡時，核酸內切酶被激活，選擇性降解染色質DNA，形成50-300 kb的大片段，并進而在核小體連接處斷裂，形成180-200 bp或其整倍數的DNA片段，這些DNA片段可從細胞中提取出來，通過瓊脂糖凝膠電泳，溴化乙啶染色呈現為梯狀條帶（DNA Ladder），并據此判斷細胞凋亡產生。凱基細胞凋亡DNA Ladder檢測試劑盒提供了一種簡便、快速地提取染色質DNA的方法，并增加對小片段DNA的回收，從而增強了檢測的敏感性。
本試劑盒可應用于培養細胞凋亡檢測（不*用于檢測組織樣本）。
二、試劑盒組份
| 組份 | Cat:KGA111（20 assays） | Cat:KGA112（50 assays） | Cat:KGA113（100 assays） | 儲存條件 |
| Lysis Buffer | 4 mL | 10 mL | 20 mL | 4℃ |
| Solution A | 400μL | 1.0 mL | 2.0 mL | -4℃ |
| Enzyme A | 400μL | 1.0 mL | 2.0 mL | -20℃ |
| Enzyme B | 400μL | 1.0 mL | 2.0 mL | -20℃ |
| Precipitant | 3.0 mL | 6.5 mL | 13.0 mL | 4℃ |
| Loading Buffer | 80μL | 0.2 mL | 0.4 mL | 4℃ |
三、試劑盒以外自備儀器和試劑
高速離心機、微量移液器、渦旋振蕩器、凝膠電泳儀、37-55℃水浴
1.5m L Microtube、PBS、胰酶消化液、冰乙醇、TE Buffer，瓊脂糖，TBE、溴化乙啶、DNA Ladder Marker
四、使用注意事項
1. DNA Ladder出現在細胞凋亡晚期，觀察細胞形態已發生皺縮出芽，染色質*凝聚，細胞核已固縮斷裂的凋亡晚期形態，建議該種形態的凋亡細胞比例在30%以上時進行DNA Ladder檢測或*行Tunel檢測，
2. DNA Ladder出現在一個較短的時間段，在凋亡早期取樣，則無DNA降解的條, 帶，而在凋亡末期取樣則產生與細胞壞死相似的DNA彌散條芾。因此取樣時間需根椐不同種類的細胞和誘導劑而摸索確定。
3. 貼壁細胞不用胰酶消化而用細胞刮收集。
4. 某些細胞不產生這種核小體間的DNA斷裂，而是產生50-300kb的大片段斷裂。
五、操作方法
1． 離心收集105~106細胞（1500×g，離心5min）于1.5mL微量離心管中；
2． 用PBS洗滌細胞二次（1500×g，離心5min），棄上清；
3． 沉淀的細胞中加入100μL Lysis Buffer，渦旋振蕩器上劇烈混合10秒， 1000×g，離心5min后移上清于另一1.5mL微量離心管中；
4． 沉淀再加入100μL Lysis Buffer重復上步，合并兩次的上清液；
5． 在上述合并的上清液中加入20μL Solution A，再加入20μL Enzyme A， 55℃反應1小時；
6． 加入20μL Enzyme B,37℃孵育1小時；
7． 加入130μL Precipitant和950μL冰乙醇, 混勻，置—20℃,1小時以上或過夜；
8． 4℃，12，000-14，000 rpm離心15-30min，小心地棄去上清，收集沉淀的DNA；
9． 加入0.5mL 70%的冷乙醇，洗DNA沉淀，再12，000-14，000 rpm離心20min；
10．棄上清，DNA沉淀于室溫干燥10 min后，加入10-15μL TE Buffer，充分攪拌溶解DNA；
11．取上述10-15μL樣品加入2-3μL Loading Buffer， 1.5%瓊脂糖凝膠電泳（凝膠和電泳緩沖液TBE均加入0.5μg/mL的溴化乙啶）；
12．5V/cm電泳1小時，紫外燈下觀察并拍照。
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