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如何利用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞周期

時間:2014-11-22 閱讀:3617
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       首先我們這邊先來看下這樣的問題:新消化獲得的細(xì)胞直接染色立馬上機(jī)檢測,這一步是不是必須的?RnaseA的作用包不包括去處胞內(nèi)的雙鏈RNA?是的話,RnaseA能直接穿膜嗎?不是的話,胞內(nèi)的雙鏈RNA不管了?陰參的設(shè)定是不是健康成人外周血的淋巴細(xì)胞就可以了?
       根據(jù)這樣的染色方法而定,原理都是先打孔再染色,因為PI沒有穿膜作用。
所以不同就在打孔的方法上。現(xiàn)在基本有兩種方法,一種就是乙醇固定。70-75%濃度效果都差不多,優(yōu)點是作用比較輕柔,可長時間固定,一般一個月都沒問題,更長時間我沒試過。適用于不能預(yù)計上機(jī)時間的朋友,可以先固定好幾批細(xì)胞然后再一起染色上機(jī)。缺點就是打孔時間較長,至少過夜才能保證打孔效果。
       另一種就是用Triton打孔,這種方法比較激烈。優(yōu)點是速度快,消化以后可以馬上打孔染色上機(jī),而且不使膜蛋白變性,不容易造成粘連。缺點就是不能長時間保存樣品,一般好半個小時內(nèi)檢測,不然時間越久細(xì)胞DNA含量的離散度越高,圖像越難看。不過現(xiàn)在很多的試劑盒都是用這種快速打孔的方式。
       膜通透性改變以后酶可以進(jìn)去。

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