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胚胎成纖維細胞,沙眼衣原體PCR檢測試劑盒

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糖原磷酸化酶a(GPa)測試盒

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【詳細說明】

商品屬性:

貨號

規格

檢測方法

YSH3410

100管/96樣

微量法

YSH3410-1

50管/48樣

紫外分光光度法


商品詳情:
糖原磷酸化酶a(GPa)測試盒測定意義:

糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個斷開α-1,4-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點前4個葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和無活性的糖原磷酸化酶b(GPb)兩種形式。糖原的分解主要在GPa的催化下進行。

測定原理:

未添加激活劑時,GPa催化糖原和無機磷產生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測定NADPH上升速率,即可反映GPa活性。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制:

試劑一:液體×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體×1瓶,4℃保存。

試劑三:粉劑×1瓶(棕色),4℃避光保存。臨用前加入667μL無水乙醇,蓋緊后充分混勻,再加入9.333 mL蒸餾水混勻,避光保存。

試劑四:粉劑×1管,4℃避光保存。臨用前加1 mL蒸餾水,充分溶解。

標準品:粉劑×1瓶,臨用前加10 mL蒸餾水,充分溶解。1μmol/mL標準液,4℃避光保存。


測定操作:

1. 分光光度計/酶標儀預熱30 min,調節波長到570 nm,蒸餾水調零。

2. 空白管:取EP管,加入10μL蒸餾水,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復顛倒EP管數次,于570nm測定吸光值,記為A空白管。顯色后務必在30min內測完。

3. 標準管:取EP管,加入10μL標準品,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復顛倒EP管數次,于570nm測定吸光值,記為A標準管。顯色后務必在30min內測完。

4. 測定管:取EP管,加入10μL上清液,100μL試劑二,100μL試劑三和10μL試劑四,混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫15 min,冷卻后反復顛倒EP管數次,于570nm測定吸光值,記為A測定管。顯色后務必在30min內測完。

注意:空白管和標準管只需要測定一次。

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