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赭曲霉素（Ochratoxin）酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書

最近更新時間：2013-1-8

提 供 商：上海研生實業有限公司資料大小：22.6KB

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本試劑盒僅供研究使用。

1使用目的：
本試劑盒用于飼料、魚、蝦和肉類組織（如雞、牛肉和豬肉），雞蛋、蜂蜜、牛奶、血
清和尿樣中赭曲霉素（Ochratoxin）殘留的定量檢測。
2實驗原理
本試劑盒采用直接競爭 ELISA 方法，在微孔板包被有赭曲霉素（Ochratoxin）偶聯抗原，
加入赭曲霉素（Ochratoxin）標準品或樣品，游離赭曲霉素（Ochratoxin）與微孔條上預包被
的赭曲霉素（Ochratoxin）偶聯抗原互相競爭抗赭曲霉素（Ochratoxin）抗體酶標記物，用
TMB 底物顯色，加入終止液后顏色由藍色變為黃色，用酶標儀在 450nm 波長下進行檢測，
吸光值與樣品中赭曲霉素（Ochratoxin）含量成反比，通過標準曲線計算樣品中赭曲霉素
（Ochratoxin）的含量。
3試劑盒組成
3.1預包被的赭曲霉素（Ochratoxin）偶聯抗原的可拆酶標板：1 塊（12 孔×8 條）。
3.2赭曲霉素（Ochratoxin）標準品：6 瓶（1ml/瓶），含量分別是：0μg/ml，0.01μg/ml,0.02
μg/ml,0.04μg/ml,0.08μg/ml,0.16μg/ml
3.3 抗赭曲霉素（Ochratoxin）抗體酶結合物：1 瓶（6ml）。
3.4 顯色液 A：1 瓶（6ml）。
3.5 顯色液 B：1 瓶（6ml）。
3.6 終止液：1 瓶（6ml），2M 硫酸。
3.7 樣本稀釋液：1 瓶（10×, 6ml），用于樣品稀釋用。
3.8 濃縮洗滌液：1 瓶（20×，20ml），用于洗板。
3.9 說明書一份。
4需要而未提供的材料
4.1設備
4.1.1波長450nm酶標儀。
4.1.2粉碎機。
4.1.3量筒。
4.1.4振蕩器。
4.1.5漏斗。
4.1.6Whatman 或相當的濾紙。
4.1.7微量移液器。
4.2試劑
4.2.1去離子水或蒸餾水。
4.2.2甲醇。
5貯存
5.1試劑盒貯存于2~8℃，切勿冷凍
5.2未用完的微孔板應該密封干燥保存
6注意
6.1使用試劑盒前請仔細閱讀說明書。
6.2不要使用過期試劑盒。
6.3試劑盒使用前，將試劑恢復至室溫（25±2℃），建議至少回溫2小時。
6.4標準品中含有，使用時應特別注意，操作時應帶手套。
6.5終止液中含有硫酸，使用時防止灼傷皮膚及腐蝕衣物。
6.6不同標準品、樣品所用吸頭不能混用，否則會影響試驗結果。
6.7不同批號試劑盒中的試劑不得混用；不同標準品、樣品所用吸頭不得混用，否則會影響
實驗結果。
6.8稀釋樣本時必須用本試劑盒中的樣本稀釋液，否則會影響實驗結果
6.9混合試劑時應避免起泡。
7工作液準備
7.1赭曲霉素（Ochratoxin）標準品溶液：0μg/ml，0.01μg/ml,0.02μg/ml,0.04μg/ml,0.08
μg/ml,0.16μg/ml
7.2濃縮洗滌液：用蒸餾水按1:20（1+19）稀釋備用
7.3樣本稀釋液：備用
7.3顯色劑：已備用，避免光線直照
7.4反應終止液：已備用
8樣品處理程序（樣品在提取過程中，要嚴格按說明書操作，提取過程中應準確稀釋，否則
會出現結果不準確，樣品應當保存在陰涼避光之處及冷藏保存）
8.1取10g粉碎的樣品，加 20ml 70%甲醇溶液
8.2強力振蕩3分鐘
8.3用Whatman 濾紙過濾
8.4取25µl處理后的樣品，加入25µl樣本稀釋液于反應孔中（樣本稀釋倍數為2）
9酶免分析步驟
9.1實驗須知
9.1.1實驗開始前請將所有試劑于盒外充分恢復至室溫（25±2℃），時間約2小時。回溫至室
溫（25±2℃）后再取出微孔條，多余的微孔條重新密封立即于2~8℃干燥保存
注：一定保證回溫充分，否則影響檢測的度和準確度。
9.1.2使用后請立即將試劑放回2~8℃保存
9.1.3請不要改變分析程序
9.1.4請使用的微量移液器
9.1.5操作一旦開始，請不要中斷任何程序
9.1.6 ELISA結果的可重復性極大程度的取決于操作程序，請嚴格按照要求操作
9.1.7為避免交叉污染，每個標準品和樣品均應使用不同的吸頭加樣
9.1.8加樣時請勿讓吸頭接觸微孔中的溶液或內表面
9.2分析步驟
9.2.1預先進行編號，標記B0、標準品和樣品的位置，推薦進行雙孔檢測
9.2.2取所需數量的微孔（微孔條可拆），將多余板條重新密封并立即放回2~8℃保存
9.2.3樣品稀釋液（10×）、濃縮洗滌液（10×）稀釋成工作液（蒸餾水或去離子水稀釋）
9.2.4在B0孔中加入50µl0.0 ng/ ml標準品溶液
9.2.5在各標準孔中加入50μl的標準品溶液
9.2.6在各樣品孔中加入50µl樣品溶液
9.2.7在所有孔中加入50µl的抗B1抗體酶結合物
9.2.8輕輕晃動反應板幾秒鐘。
9.3 37℃溫浴30min（溫浴過程中不時輕拍反應板，可以減少雙孔誤差）
9.3.1甩掉孔中液體，用洗液洗滌微孔板5次，zui后一次應在吸水紙上拍打以*除去孔中液
體。
9.4反應
9.4.1洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50µl顯色液A，再加 50µl顯
色液B；輕微晃動反應板使之*混勻
9.4.2 37℃溫浴10min
9.4.3每孔中加入50µl終止液，混勻
9.4.4在450nm下檢測吸光度，結果在5min內讀取。
10結果計算
10.1定量分析
10.1.1所獲得的每個濃度標準溶液和樣本吸光度值的平均值（B）除以*個標準（0標準）
的吸光度值（B0）再乘以100%，即百分吸光度值。
B— 標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0— 0µg/L標準溶液的平均吸光度值
10.1.2以赭曲霉素（Ochratoxin）濃度的對數值為X軸，百分吸光度值為Y軸，繪制標準曲線
圖。根據樣品百分吸光度值，可從曲線上得到對應點的橫坐標，即為赭曲霉素（Ochratoxin）
濃度的對數值，求得反對數即為測定液中赭曲霉素（Ochratoxin）濃度C（μg/ml）
10.1.3由于樣品經過了預先稀釋，因此根據標準曲線所得出的樣品濃度一定要再乘以其稀釋
倍數。
10.2半定量測定
10.1.1目測半定量測定：首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行，根據樣品與標準品吸光
度值的高低比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
10.1.2儀器半定量測定：首先選擇一個適當的標準液與樣品同運行，根據樣品與標準品顏色
深淺比較，判斷樣品濃度值是小于還是大于標準值。
11特異性
物質 交叉反應
赭曲霉素（Ochratoxin） 100%
12試劑盒參數
本試劑盒檢測下限為0.01μg/ml
B0吸光度*值應大于1.0
試劑盒吸光度板內誤差小于8％，板間誤差小于15％。
用本說明書提供的組織樣本提取方法回收率大于80％。
13標準曲線模式（僅供參考）
試 劑 盒 提 供 的 標 準 曲 線 范 圍 為0.01μg/ml~0.16μg/mll。

詳情請看：赭曲霉素（Ochratoxin）酶聯免疫分析（ELISA）試劑盒使用說明書

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