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微生物菌種保藏方法及復壯
最近更新時間：2011-3-4
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微生物菌種保藏
在發酵工業中，具有良好性狀的菌種的獲得十分不容易，如何利用優良的微生物菌種保藏技術，使菌種經長期保藏后不但存活健在，而且保證高產突變株不改變表型和基因型，特別是不改變初級代謝產物和次級代謝產物的高產能力，即很少發生突變，這對于菌種極為重要。
微生物菌種保藏技術很多，但原理基本一致，即采用低溫、干燥、缺氧、缺乏營養、添加保護劑或酸度中和劑等方法，挑選優良純種，是它們的休眠體，使微生物生長在代謝不活潑，生長受抑制的環境中。具體常用的方法有：蒸餾水懸浮；干燥-載體保藏等方法。
蒸餾水懸浮法
這是一種zui簡單的菌種保藏方法，只要將菌種懸浮于無菌蒸餾水中，將容器封好口，于10℃保藏即可達到目的。好氣性細菌和酵母等可用此法保存。
干燥-載體保藏
此法適用于產孢子或芽孢的微生物的保藏。是將菌種接種于適當的載體上，如河砂、土壤、硅膠、濾紙及麩皮等，以保藏菌種。以沙土保藏用得較多，制備方法為：將河砂經24目過篩后用10%~20%鹽酸浸泡3~4 h，以除去其中所含的有機物，用水漂洗至中性，烘干，然后裝入高度約1cm的河沙于小試管中，121℃間歇滅菌3次。用無菌吸管將孢子懸液滴入砂粒小管中，經真空干燥8 h，于常溫或低溫下保藏均可，保存期為1~10年。土壤法以土壤代替砂粒，不需酸洗，經風干、粉碎，然后同法過篩、滅菌即可。一般細菌芽孢常用砂管保藏，霉菌的孢子多用麩皮管保藏。
退化菌種的復壯
退化菌種的復壯可通過純種分離和性能測定等方法來實現，其中一種是從退化菌種的群體中找出少數尚未退化的個體，以達到恢復菌種的原有典型性狀。另一種是在菌種的性能尚未退化前就經常而有意識地進行純種分離和性能的測定工作，以達到菌種的性能逐步有所提高。所以這實際上是一種利用自發突變不斷從中進行選種的工作。具體的菌種的復壯措施如下：
純種分離 采用平板劃線分離法、稀釋平板法或涂布法均可。把仍保持原有典型優良性狀的單細胞分離出來，經擴大培養恢復原菌株的典型優良性狀，若能進行性能測定則更好。還可用顯微鏡操縱器將生長良好的單細胞或單孢子分離出來，經培養恢復原菌株性狀。
通過寄主進行復壯 寄生型微生物的退化菌株可接種到相應寄主體內以提高菌株的活力。
聯合復壯 對退化菌株還可用高劑量的紫外線輻射和低劑量的DTG聯合處理進行復壯。