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大提柱式質粒DNAout
點擊次數：1258 發布時間：2013-6-26
大提柱式質粒DNAout
產品及特點 本試劑盒是用于質粒DNA大量制備與純化的試劑盒。菌體先經堿裂解法處理，再通過離心吸附柱，專一結合DNA，zui后洗去雜質，快速提取質粒DNA，全套操作可以在30分鐘之內完成。使用本試劑盒可從50-100 mL過夜培養的菌液純化得到高達300-500 ug的高純度質粒DNA（OD260/OD280 = 1.8-2.0），可以直接用于酶切、轉化、測序及PCR等。
1． 快速、步驟少，整個操作在半個小時之內完成。
2． 純度高，采用本試劑盒提取的質粒OD比值在1.8-2.0之間。
3． 產量高，每毫升過夜培養的細菌可以提取到2-5 ug/mL。
4． 用途廣，適用于低拷貝和高拷貝質粒。
5． 價格低，比多數國內同類產品的價格更便宜。
規格及成分 成 份 5次包裝 10次包裝
溶液A 30 mL 60 mL
溶液B 30 mL 60 mL
RNase A溶液（10mg/mL） 0.3 mL 0.6 mL
溶液C 40 mL 80 mL
大提離心吸附柱 5套 10套
通用洗柱液 100 mL 200 mL
DNA洗脫液2.0 10 mL×2 50 mL
使用手冊 1份 1份
運輸及保存 RNase A溶液需要-20℃保存，其余成分可室溫或4℃保存，如有沉淀可加熱溶解后再使用。
自備試劑 無。
使用方法 1. 用250 mL離心管收集100-300 mL菌液，5000 rpm 離心10分鐘，去除上清。
2. 往細菌沉淀中加入6 mL溶液A，充分振蕩懸浮（*次使用時需要將RNase A溶液全部加入到溶液A中并混合均勻，未用完的、含RNase A的溶液A需放4℃保存）。注意：充分重懸細胞沉淀使之無細胞結塊狀物對于獲得高的質粒產量十分重要。
3. 加入6 mL 溶液B，溫和翻轉10 余次至透明。若混合液不透明，應減少細菌的用量或室溫放置5-10分鐘直到裂解液變透明。注意: 避免劇烈振蕩，否則細菌基因組DNA將斷裂為小片段，與質粒難以分離，污染質粒DNA。
4. 加入冰浴的8 mL 溶液C，顛倒混勻，冰上放置10分鐘?；旌衔镏袑⒂邪咨鯛钗镄纬?。注意不要過分振蕩。
5. 6000 rpm離心10分鐘。如果離心管承受能力強，離心速度還可以適當提高以充分沉淀絮狀物。
6. 將上清液（約20 mL）轉移到離心吸附柱中，放入50 mL 套管中。
7. 6000 rpm 離心5 分鐘，質粒DNA將與離心吸附柱中的膜結合。棄穿透液。
8. 將10 mL 通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜置2 分鐘后6000 rpm 離心5分鐘，棄穿透液。
9. 重復上步一次，即將10 mL通用洗柱液加入到離心吸附柱中，室溫靜置2 分鐘后6000 rpm 離心5分鐘，棄穿透液。
10. 室溫6000 rpm 空甩5分鐘，棄穿透液。注意：此步對去除殘留通用洗柱液很重要，否則通用洗柱液會影響DNA的使用。
11. 將離心吸附柱放入一個自備的、干凈的50 mL塑料離心管中，加1 mL DNA洗脫液2.0（洗脫液如加熱到50-65℃效果更佳），室溫靜置2分鐘后6000rpm 離心5分鐘，收集液即是質粒DNA溶液。
12. 本試劑盒中的離心吸附柱吸附能力較強，所以再用1 mL DNA洗脫液2.0洗脫3-4次才能把絕大部分質粒DNA洗脫下來。得到的RNA可以收集在一起立即使用或存放于-80℃待用。注：如果DNA洗脫液不夠，可以用自備的DEPC水代替。注：一般情況下，*次洗脫可以洗脫約25%的質粒DNA；第二次洗脫可以洗脫約35%的質粒DNA；第三次洗脫可以洗脫約20%的質粒DNA；第四次洗脫可以洗脫約10%的質粒DNA；第五次洗脫可以洗脫約8%的質粒DNA。
13. 合并所得質粒DNA，立即使用或-20℃儲存。如果需要使用液相內毒素清除劑清除質粒DNA中的內毒素，可以直接將此步所得的DNA溶液用于去內毒素處理。如果DNA濃度太低，可以另購本公司的核酸濃縮劑進行濃縮。