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大豆胰蛋白酶抑制因子酶聯免疫分析試劑盒操作步驟

點擊次數:2133 發布時間:2012-6-6

大豆胰蛋白酶抑制因子酶聯免疫分析試劑盒操作步驟

操作步驟
1.   標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。   大豆胰蛋白酶抑制因子 
200 ng/L   5 號標準品  150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液
100 ng/L   4 號標準品  150µl 的5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
50ng/L   3 號標準品  150µl 的4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
25ng/L   2 號標準品  150µl 的3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
12.5ng/L   1 號標準品  150µl 的2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
2.   加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl,然后再加待測樣品 10 µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
3.   溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。      
4.   配液:將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
5.   洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5 次,拍干。
6.   加酶:每孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。  
7.   溫育:操作同 3。
8.   洗滌:操作同 5。
9.   顯色:每孔先加入顯色劑 A50µl,再加入顯色劑 B50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.  大豆胰蛋白酶抑制因子
10.  終止:每孔加終止液50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
11.  測定:以空白空調零,450nm 波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。  測定應在加終止
計算 
    以標準物的濃度為橫坐標,OD 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據樣品的
OD值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數;或用標準物的濃度與 OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數,即為樣品的實際濃度。  

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