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培養基制備原則和要求

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培養基制備原則和要求

(一)培養基必須含有細菌生長繁殖所需要的營養物質。所用的化學藥品必須純凈,稱取的份量務必準確。
(二)培養基的酸堿度應符合細菌生長要求。按各種培養基要求準確測定調節pH值。多數細菌生長的適宜pH值為7.2~7.6,呈弱堿性。
(三)培養基的滅菌時間和溫度,應按照各種培養基的規定進行,以保證滅菌效果及不損失培養基的必需營養成分。培養基經滅菌后,必須置37℃溫箱中培養24小時,無菌生長者方可應用。

(四)所用器皿須潔凈,忌用鐵或鋼質器皿,要求沒有抑制細菌生長的物質存在。
(五)制成的培養基應該是透明的,以便觀察細菌生長性狀以及其他代謝活動所產生的變化。
二、培養基制備過程
不同的培養基其制備方法也不同,一般包括以下步驟:
(一)準確稱量試劑 根據不同的菌類和用途,選擇適宜的培養基,培養基所需試劑必須純凈。
(二)校正pH值 將稱量好的培養基各種成分放入容器內,標記劃線,加熱溶解,補充水分,測定酸堿度,常用pH6.8~8.0的精密試紙或酸度計測定。用1N
NaOH和1N HCl調節pH值到適宜范圍內。
(三)過濾 將玻璃漏斗置鐵架上,再用紗布夾棉花或用濾紙放在漏斗中,將上述培養基倒入其中過濾至透明。
(四)分裝 將過濾后的培養基分裝于中試管或三角瓶內(試管內每支裝5mL;三角瓶中裝100~150ml),塞好棉塞用牛皮紙包扎好,準備滅菌。
(五)滅菌
培養基的滅菌,常用高壓蒸汽滅菌法。一般微生物的營養細胞在水中煮沸后即被殺死,但細菌的芽胞有較強的抗熱性,須經高壓蒸汽滅菌才能達到*滅菌的目的。根據蒸汽溫度隨壓力升高而上升的原理,即壓力越大,蒸汽溫度就越高。因此,在同一溫度條件下,采用高壓蒸汽滅菌比干熱滅菌法效果要好。而且在濕熱情況下,菌體吸收水分后,其蛋白質易于凝固變性,因為蒸汽的穿透力強,殺菌效果好。

高壓蒸汽滅菌,一般采用15磅/平方(即1.05kg/cm2)壓力,此時的溫度是121.3℃。滅菌20~30分鐘后,可達到*滅菌的目的。在進行滅菌的時候,首先要把滅菌鍋內的冷空氣排出,否則,冷空氣存在會降低鍋內的實際溫度,影響滅菌效果。

 

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