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研域(上海)化學試劑有限公司

ELISA試劑盒的雙抗體夾心法檢測腦膜炎奈瑟菌可溶性抗原

時間:2014-2-11閱讀:1334

ELISA試劑盒實驗原理

用包被于固相載體的腦膜炎奈瑟菌(Neisseria meningitidis)多糖抗體,結合待測標本中的相應抗原,再加酶標抗體形成夾心,zui后加底物使顯色。顯色深淺在一定范圍內與標本中腦膜炎奈瑟菌抗原的含量呈正相關。

主要試劑與器材

1.待檢血清或腦脊液;

2.抗腦膜炎奈瑟菌(A群)多糖抗體;

3.辣根過氧化酶(HRP)標記抗體;

4.包被液、稀釋液、終止液;

5.酶標儀。

ELISA試劑盒的操作步驟

1.包被抗體的制備:抗腦膜炎奈瑟菌血清用50%飽和硫酸銨鹽析,再通過SPA-Sepharose 4B免疫吸附柱,獲取IgG用于包被。

2.用包被液將包被抗體稀釋成20μg/ml,每孔100μl,4℃12h后用PBS洗3次。

3.待測標本(需經56℃,30min滅活)孵育2h,洗3次,拍干。

4.每孔加酶標抗體(zui適工作稀釋度用方陣法選定)100μl,37℃孵育2h后洗3次,拍干。

5.每孔加底物(鄰苯二胺-H2O2)溶液100μl,37℃ 20min顯色,用2mol/L H2SO4終止反應,測492nm吸光度(A)。

ELISA試劑盒的結果分析

用50-100份健康人混合血清按上述elisa測A值,以大于此A值均值的兩個標準差為陽性,也可以P/N值≥2.1為陽性。

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