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原果膠含量檢測試劑盒說明書

可見分光光度法

貨號：BC3680

規格：50T/24S

產品組成：使用前請認真核對試劑體積與瓶內體積是否一致，有疑問請及時聯系索萊寶工作人員。

溶液的配制：

1、 提取液一：80%乙醇，自備。即將80 mL無水乙醇和20 mL蒸餾水混合。

2、 試劑一：濃硫酸60 mL，自備。

3、 標準品：10 mg半乳糖醛酸，臨用前加入0.943 mL提取液三，配成50 μmol/mL的標準液。

產品說明：

果膠是植物細胞壁主要組成成分之一，分為水溶性果膠和不溶性果膠，不溶性果膠為原果膠。原果膠是不溶于水的物質，但可在酸、堿、鹽等化學試劑及酶的作用下，加水分解轉變成水溶性果膠，在食品、紡織、印染、煙草、冶金等領域具有較廣泛的應用。

原果膠在堿性條件下水解為可溶性果膠，并進一步轉化為半乳糖醛酸，產物在強酸中與咔唑縮合生成紫紅色化合物，在530nm處有特征吸收峰。

注意：實驗之前建議選擇2-3個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者增加樣本量進行檢測。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調式移液槍、研缽/勻漿器、丙酮、濃硫酸、無水乙醇和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本處理（可適當調整待測樣本量，具體比例可以參考文獻）

取約0.1g樣本，加入1mL 提取液一，室溫快速勻漿，95℃水浴20min，冷卻至室溫，4000g 25℃離心10min，棄上清。沉淀加入1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗2遍（渦旋振蕩2min左右，4000g 25℃離心10min，棄上清即可），沉淀即為粗細胞壁，加入1mL提取液二（去除淀粉）浸泡15小時，4000g 25℃離心10min，棄上清，加入1mL提取液三，充分勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清液待測。

二、測定步驟

1、 分光光度計預熱30min以上，調節波長至530nm，蒸餾水調零。

2、 將50μmol/mL標準液用提取液三稀釋為0.7、0.6、0.5、0.4、0.2、0.1、0.05、0.025μmol/mL的標準溶液備用。

3、 操作表：

三、原果膠含量的計算

1、 標準曲線的繪制：

以各個標準溶液的濃度為x軸，其對應的ΔA標準為y軸，繪制標準曲線，得到標準方程y=kx+b，將ΔA測定帶入方程得到x（μmol/mL）。

2、 原果膠含量的計算：原果膠含量(μmol/g 質量)=x×V提取液三÷W =x÷W

V提取液三：加入提取液三的體積，1mL；W：樣本質量，g。

注意事項：

1、 濃硫酸具有強腐蝕性，操作時需特別注意，90℃加熱取出后冷卻再打開蓋子，以防液體飛濺燒傷。

2、 若ΔA超過0.6，可將樣本用提取液三進行適當稀釋再進行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數。

實驗實例：

1. 取0.1g木槿加入1mL 提取液一，室溫快速勻漿，95℃水浴20min，冷卻至室溫，4000g 25℃離心10min，棄上清。沉淀加入1.5mL 提取液一和丙酮交替各洗2遍（渦旋振蕩2min左右，4000g 25℃離心10min，棄上清即可），沉淀即為粗細胞壁，加入1mL提取液二浸泡15小時，4000g 25℃離心10min，棄上清，加入1mL提取液三，充分勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清液之后按照測定步驟操作，測得計算ΔA測定=A測定管-A對照管=0.194-0.044=0.15，依據標準曲線y=0.9322x-0.0232，計算X=0.1858μmol/mL；按樣本質量計算含量得：原果膠含量(μmol/g 質量)= x÷W=1.858 μmol/g 質量。

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