ELISA可用于測定抗原，也可用于測定抗體。根據試劑的來源和標本的性狀以及檢測的具備條件，可設計出各種不同類型的檢測方法。主要有：直接法、雙抗體夾心法、間接法、競爭法、雙位點一步法、捕獲法、應用親和素和生物素系統（ABS）等。
ELISA必須遵守以下3個核心原理：（1）抗原或抗體能吸附于固相載體表面，并保持其免疫學活性；（2）抗原或抗體可通過共價鍵與酶連接形成酶結合物，而此種酶結合物仍能保持其免疫學和酶學活性；（3）酶結合物與相應抗原或抗體結合后，可根據加入底物的顏色反應來判定是否有免疫反應的存在，而且顏色反應的深淺是與標本中相應抗原或抗體的量成正比例的，可根據已知濃度的抗原或抗體的顏色反應的深淺繪制標準曲線并依此計算出未知樣品中抗體或抗原的濃度。
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