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流式細胞儀和細胞內細胞因子染色
無紅細胞的單細胞懸浮液制備的脾細胞，刀豆蛋白A爆炸或PBL在FACS緩沖液（PBS中，用1％牛血清白蛋白和0.05％NaN的3）和細胞進行染色，在黑暗中在冰上20分鐘，進行表面的表達CD8α（ APC-CY7），CD4（PerCP CY5.5），CD3ε（FITC），CD137（FITC），CD19（PerCP-Cy5.5標記），或NK1.1（PE-CY7所有的抗體，BD生物科學，圣地亞哥， CA）。細胞內染色，細胞透性使用的Cytofix / Cytoperm試劑盒，根據生產商的方案，和細胞內細胞因子使用腫瘤壞死因子-α，腫瘤壞死因子-α或IFN-γ（PR-700，BD生物科學）。四聚體分析，進行溫育的細胞懸浮液與H2-K b / TRP-2的180-188四聚體（SVYDFFVWL，APC-標記，Sanquin，）或H2-K b / OVA 257-264四聚體，實物禮品CM 25分鐘，在37°C和5％CO 2之前，隨后的表面抗體染色。表面MHC-I類檢測是由孵化IFN-γ引物和未曝光B16.F10細胞與小鼠抗鼠MHC I類抗體，圣迭戈，隨后孵育檢測的山羊抗小鼠IgG2a抗體，測量樣品在FACS廣東II流式細胞儀（Beckton Dickinson公司，圣迭戈，CA）。使用FlowJo軟件的數據進行了分析。

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