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小鼠丙二醛酶聯(lián)elisa試劑盒實驗原理

閱讀：623 發(fā)布時間：2013-10-16

檢測范圍： 96T

0.3 nmol/L -8 nmol/L

使用目的：

本試劑盒用于測定小鼠血清、血漿及相關液體樣本中丙二醛（MDA）含量。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠丙二醛（MDA）水平。用純化的小鼠丙二醛（MDA）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入丙二醛（MDA），再與HRP 標記的丙二醛（MDA）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的丙二醛（MDA）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中小鼠丙二醛（MDA）濃度。

試劑盒組成

1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶

2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品（16 nmol/L） 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份

5 顯色劑A 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張

6 顯色劑B 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

操作步驟

1. 標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

8 nmol/L 5 號標準品 150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

4 nmol/L 4 號標準品 150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2 nmol/L 3 號標準品 150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

1 nmol/L 2 號標準品 150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

0.5 nmol/L 1 號標準品 150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2. 加樣：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品終稀釋度為5 倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30 分鐘。

4. 配液：將30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水30 倍稀釋后備用

5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30 秒后棄去，如此重復5 次，拍干。

6. 加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7. 溫育：操作同3。

8. 洗滌：操作同5。

9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15 分鐘.

10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉黃色）。

11. 測定：以空白空調(diào)零，450nm 波長依序測量各孔的吸光度（OD 值）。測定應在加終止后15 分鐘以內(nèi)進行。

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