考馬斯亮藍染色液正確的染色步驟

描述：
常規考馬斯亮藍SDS-PAGE凝膠蛋白質染色是實驗室常用的凝膠染色方法。銀染方法雖然靈敏度高，但所需試劑復雜并且有毒有害，操作步驟繁瑣，難以控制獲得好的染色效果。

考馬斯亮藍有G-250和R-250兩種。
游離狀態的考馬斯亮藍G250 在酸性溶液中呈藍偏綠色，與蛋白質結合后呈藍色，蛋白質含量與顏色的深淺成正比，經595nm 測定，可作出蛋白質含量與吸光度值的標準曲線，并求出未知樣品的蛋白質濃度。R-250呈藍色，有輕微紅色。

染色步驟：
1. 此染色液即為工作液，使用時直接將聚丙烯酰胺凝膠放在培養皿中以考馬斯亮藍染色液覆蓋凝膠，并緩慢搖動2h；也可根據實際情況調整時間。
2. 傾去染色液，用脫色液沖洗凝膠。
3. 以脫色液覆蓋凝膠，緩慢搖動2h，（或者根據時間情況調整脫色時間）傾去脫色液，再加入新脫色液進行脫色，直至獲得清晰的藍色的條帶和干凈的背景（通常此過程需要2～4h，也可脫色過夜至清晰的藍色的條帶和干凈的背景）。
4. 對凝膠進行分析和照相，凝膠可放置在7％的乙酸中保存。也可用凝膠干膠裝置（P2000）對凝膠進行處理后保存。

① 上樣緩沖液中包括甘油,溴酚藍,SDS等,甘油主要作用是防止樣品漂浮出點樣孔,溴酚藍作為電泳指示劑,用來觀察電泳進度,SDS用于一些核酸結合蛋白的變性解離.
②染色液與凝膠中核酸結合,以便于在紫外光下顯示核酸條帶.
loading buffer 的中文名字叫上樣緩沖液，6kb的緩沖液中可以顯示兩條帶，前面的紫藍色的條帶是溴酚藍，在0.6%、1%、1.4%和2%瓊脂糖凝膠電泳中，溴酚蘭的遷移率分別與1Kb、0.6Kb、0.2Kb和0.15Kb的雙鏈線性DNA片段大致相同。
后面的藍色條帶是二甲苯氰，它在1%和1.4%瓊脂糖中電泳時，其遷移速率分別與2Kb和1.6Kb的雙鏈線性DNA大致相似。而對于PAGE膠他們的遷移速率也分別不同。