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滅活內源性酶及封閉內源性生物素
閱讀：1399 發布時間：2010-7-12在生物體組織內均含有一定量的內源性酶和內源性生物素，如富含血細胞的組織標本有大量具有活性的過氧化物酶，肝、脾、腎、腦及胚胎組織中富含生物素。如采用過氧化物酶檢測系統或堿性磷酸酶和NBT/BCIP顯色系統進行免疫組織化學染色時．酶的作用是催化底物，使顯色劑顯色，而組織中的內源性酶同樣也能催化底物，使其顯色，這就影響免疫組織化學染色的特異性。在使用親和素試劑的免疫組織化學染色中，內源性生物素易結合親和素，形成親和素一生物素復合物，導致假陽性。所以在染色之前應設法將組織內的內源性酶滅活或將內源性生物素封閉，以保證染色的特異性。
（1）滅活內源性過氧化物酶：將組織在3％甲醇—H2O2（3ml純甲醇中加入30％H2020．3ml，現用現配）中室溫浸泡10分鐘，繼而用PBS沖洗3次，每次5分鐘。
（2）滅活堿性磷酸酶：zui常用的方法是將左旋咪唑（以每毫升加24mg）加入底物液中并保持pH為7．6～8．2，可除去大部分內源性堿性磷酸酶，對于仍能干擾染色的酸性磷酸酶可用0．05mol/L酒石酸抑制。
（3）封閉內源性生物素：將組織切片用0．0l％親和素溶液室溫處理10～20分鐘，使其結合位點飽和，以消除內源性生物素的活性。也可購買生物素阻斷劑試劑盒，其中A液為親和素．B液為生物素。使用時加A液l滴，室溫10分鐘，PBS沖洗3次，每次2分鐘；加B液1滴。室溫10分鐘．PBS沖洗3次，每次2分鐘。