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技術文章

植物轉基因技術

閱讀:1037          發布時間:2011-1-25

(1)農桿菌介導轉化法    將外植體放入含有外源基因的農桿菌(Agrobacteriumtume/ociens)菌液中浸泡,然后轉入共培養基,再轉入篩選培養基誘導抗性愈傷組織和抗性芽,生根后的抗性植株移栽至營養缽生長。

 
    (2)基因槍法    又稱微彈轟擊法。其基本原理是將外源DNA黏附在微小的金粒或鎢粒表面,然后在高壓的作用下,微粒被高速射入受體細胞或組織,微粒上的外源DNA進入細胞后,整合到植物染色體上,得以表達,從而實現基因的轉化。
 
    (3)花粉管通道法    在植物授粉時將含目的基因的DNA溶液涂于柱頭上,利用植物在開花、受精過程中形成的花粉管通道,將外源DNA導入受精卵細胞,并進一步地整合到受體細胞的基因組中,隨著受精卵的發育而成為含轉基因的新個體。該方法于80年代初期由我國學者周光宇提出。我國目前推廣面積zui大的轉基因抗蟲棉就是用花粉管通道法培育出來的。該法的zui大優點是不依賴組織培養人工再生植株,技術簡單,不需要裝備精良的實驗室,常規育種工作者易于掌握。
 
    (4)微注射法    首先制備植物原生質體,游離出細胞,在倒置顯微鏡和顯微操作器的幫助下,將目的基因DNA通過微管注射到受體細胞中。
 
    (5)電穿孔法    在短時間的高壓直流電脈沖的沖擊下,可以使原生質膜的分子疏松,形成暫時性的直徑為3~4nl-n的小孔,但對原生質體生活力影響不大。這時,存在于原生質體周圍溶液中的外源DNA,就可以通過這種小孔進入原生質體,實現基因的直接轉移。
 
    (6)微束激光打孔法    原生質體在短時間的微束激光照射下,可在質膜表面形成面積約0.25Pm2左右的小孔,使DNA分子進入細胞。

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