性做久久久久久坡多野结衣-性做久久久久久久久浪潮-性欲影院-性影院-国产精品线路一线路二-国产精品兄妹在线观看麻豆

您好, 歡迎來到化工儀器網

| 注冊| 產品展廳| 收藏該商鋪

13764356938

technology

首頁   >>   技術文章   >>   專題蛋白質技術的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗

上海金鵬分析儀器有限公司

立即詢價

您提交后,專屬客服將第一時間為您服務

專題蛋白質技術的SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳實驗

閱讀:2324      發布時間:2019-3-1
分享:

[原理]
蛋白質在十二烷基硫酸鈉(SDS)和巰基乙醇的作用下,分子中的二硫鍵還原,氫鍵等打開,形成按1.4gSDS/1g蛋白質比例的SDS-蛋白質多肽復合物,該復合物帶負電,故可在聚丙烯酰胺凝膠電泳中向正極遷移,且主要由于凝膠的分子篩作用,遷移速率與蛋白質的分子量大小有關,因此可以濃縮和分離蛋白質多肽。

聚丙烯酰凝膠電泳分離蛋白質多數采用一種不連續的緩沖系統,主要分為較低濃度的成層膠和較高濃度的分離膠,配制凝膠的緩沖液,其pH值和離子強度也相應不同,故電泳時,樣品中的SDS-多肽復合物沿移動的界面移動,在分離膠表面形成了一個極薄的層面,大大濃縮了樣品的體積,即SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳的濃縮效應。

[試劑]
1、30%凝膠貯備液:稱取29g 丙烯酰胺(Acr)和1g 甲叉-雙丙烯酰胺(Bis),加蒸餾水至100ml,濾紙過濾貯存。
2、10% SDS:稱取SDS 10g 加蒸餾水至100ml。
3、10%過硫酸胺(AP)
4、N,N,N’,N’四甲基乙二胺(TEMED)
5、5×電泳緩沖液:于900ml蒸餾水中分別加入15.1g Tris、94g甘氨酸、5g SDS,混勻后加蒸餾水至1 000ml。
6、1.5mol/L Tris-HCl(pH8.8)和1.0mol/L Tris-HCl(pH6.8)
7、電泳加樣緩沖液
10mmol/LpH6.8 Tris
200mmol/LDTT
4%SDS
0.2% 溴酚蘭
20% 甘油
8.正丁醇

[器材]
1、移液器
2、移液管
3、燒杯
4、垂直電泳槽
5、電泳儀

[操作步驟]
1.配制分離膠濃度8%、體積15ml
H2O 6.9ml
30%凝膠貯備液 4.0ml
1.5mol/L Tris-HCl(pH8.8) 3.8ml
10%SDS 0.15ml
10%過硫酸胺 0.15ml
TEMED 0.01ml
2.一旦加入TEMED,混勻后立即小心地將分離膠注入準備好的玻璃板間隙中,為成層膠留有足夠空間。用毛細管輕輕在其頂層加入幾毫升正丁醇,以阻止空氣中的氧氣對凝膠聚合的抑制作用。
3.聚合完成之后,倒掉覆蓋液體,用去離子水洗凝膠上部數次,盡可能用吸水紙吸干頂端的殘存液體。
4.配制5%成層膠5ml,插入梳子,小心避免混入氣泡,垂直放置室溫下。

H2O 3.4ml
30%凝膠貯備液 0.83ml
1.0mol/Ltris-HCl(pH6.8) 0.63ml
10%SDS 0.05ml
10%過硫酸胺 0.05ml
TEMED 0.01ml
5.在成層膠聚合時,將樣品與加樣緩沖液混勻,100℃加熱3min。
6.成層膠聚合完成后,用去離子水沖洗梳孔以除去未聚合的丙烯酰胺,將凝膠放入電泳槽上。
7.加樣
8.電泳:開始時電壓為8V/cm凝膠,染料進入分離膠后,將電壓增加到15V/cm凝膠,繼續電泳直到染料抵達分離膠底部,斷開電源。
9.取下凝膠,固定、染色或進行Western blot分析。

會員登錄

請輸入賬號

請輸入密碼

=

請輸驗證碼

收藏該商鋪

標簽:
保存成功

(空格分隔,最多3個,單個標簽最多10個字符)

常用:

提示

您的留言已提交成功!我們將在第一時間回復您~
在線留言
主站蜘蛛池模板: 阿坝| 柘城县| 江油市| 诏安县| 尉犁县| 阜南县| 瑞昌市| 宜城市| 远安县| 仁寿县| 嘉祥县| 绥江县| 杭锦旗| 广元市| 湾仔区| 闻喜县| 安丘市| 云霄县| 山东| 龙川县| 格尔木市| 玉林市| 东乌珠穆沁旗| 海丰县| 古浪县| 呼伦贝尔市| 蓝山县| 西畴县| 和林格尔县| 滦平县| 五家渠市| 密山市| 吴江市| 汶川县| 邵东县| 绥棱县| 北京市| 五大连池市| 扎囊县| 百色市| 徐水县|