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紫外吸收法測定蛋白質(zhì)濃度的基本原理及優(yōu)缺點

時間:2022-6-29閱讀:12201
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原理:蛋白質(zhì)分子中常含有酪氨酸、色氨酸、苯丙氨酸等苯環(huán)結(jié)構(gòu),在紫外280nm波長處有最大吸收峰,其光吸收值與蛋白質(zhì)濃度成正比,故可以用280nm波長吸收值大小來測定蛋白質(zhì)含量。
優(yōu)點:
1.快速;
2.對蛋白質(zhì)無破壞性。
缺點:
1.不是嚴格的定量方法。因為此法是根據(jù)酪氨酸(Tyr)、苯丙氨酸(Phe)、色氨酸(Trp)殘基的強吸收值來測定的,不同的蛋白質(zhì)具有不同的消光系數(shù)。另外,當?shù)鞍踪|(zhì)分子中不含Tyr、Phe或Trp殘基時,該方法就不能檢出蛋白。(此法用于測粗提總蛋白濃度較為適宜)
2.核酸可引起強烈干擾。


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