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甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎（MYP）：

用途：

用于蠟樣芽孢桿菌的菌數測定及分離培養（GB/T4789.28-2003中4.64，GB/T4789.14-2003，參考SN0176-92）。

原理：
蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、維生素和生長因子；D—甘露醇為可發酵糖類；氯化鈉維持均衡的滲透壓；瓊脂是培養基的凝固劑；酚紅為pH指示劑；卵黃含有卵磷脂，蠟樣芽孢桿菌產生卵磷脂酶，在菌落周圍產生沉淀環；并不發酵D—甘露醇產酸使菌落顯紅色；多粘菌素B可抑制雜菌的生長。

配方（每升）：

蛋白胨	10g
牛肉膏粉	1g
D—甘露醇	10g
氯化鈉	10g
瓊脂	15g
酚紅	0.025g

zui終 pH7.4±0.2

使用方法：（平板計數法）
1、稱取本品46g，加入蒸餾水或去離子水1 L，攪拌加熱煮沸至*溶解，分裝三角瓶，每瓶100mL，121℃滅菌15分鐘。

2、用時加熱溶化瓊脂，冷至50℃后，每100mL培養基基礎中加入配套試劑1支（SR0170）（多粘菌素B10000IU）和50%卵黃液5mL，混勻后傾注滅菌培養皿。

3、樣品的制備。

以無菌操作將檢樣25g（mL）用滅菌生理鹽水或磷酸鹽緩沖液做成10^-1—10^-5的稀釋液。

4、取各稀釋液0.1mL接種到MYP瓊脂平板上，用滅菌L形玻璃棒均勻涂布于整個瓊脂表面。每稀釋度接種兩個MYP瓊脂平板。

5、將平板置于36±1℃培養12－20h。

6、選取適當菌落的平板進行計數。并計算同一稀釋度兩個平板的平均菌落數。

　      蠟樣芽孢桿菌在MYP平板上生成的菌落為粉紅色，環繞產生卵磷脂酶沉淀環。如反應不典型，可繼續培養24h再計數。
7、     計數后從每個平板上選取5個已計數的菌落，按有關操作進行證實實驗。
8、     根據證實實驗確定為蠟樣芽孢桿菌的菌落數，按比例計算出該皿內的蠟樣芽孢桿菌菌落數，然后乘其稀釋倍數，即得每克（或mL）樣品所含蠟樣芽孢桿菌數。例如MYP平板的可疑菌落為25個，取5個鑒定，證實為4個，乘上稀釋倍數（如10^-4），再乘上1 g（或mL）檢樣數（取的是0.1mL樣）則為：

25×4／5×10^-4×10＝2×10⁶

附：　　　50%卵黃液:
取鮮雞蛋，用硬刷將蛋殼*洗凈，瀝干，放于70%酒精溶液中浸泡1h，以無菌操作取出卵黃，加入等量滅菌生理鹽水，混勻后備用。　

質量控制：

質控菌株接種后于36±1℃培養24h，結果如下。

菌名	菌號	生長狀況	培養特征
蠟樣芽孢桿菌	CMCC（B）63303	良好	菌落粉紅色，周圍有較大沉淀環
枯草芽孢桿菌	CMCC（B）63501	良好	黃色菌落，無沉淀環
大腸埃希氏菌	ATCC25922	不生長	——

貯存：貯存于避光、陰涼干燥處，用后立即旋緊瓶蓋。貯存期三年。

規格：250g

參考文獻：

GB/T4789.14－2003 中華人民共和國國家標準食品衛生微生物檢驗蠟樣芽孢桿菌檢驗
GB/T4789.28－2003中華人民共和國國家標準食品衛生微生物檢驗染色法，培養基和試劑

SN/T 0176－92 中華人民共和國進出口商品檢驗行業標準出口食品中蠟樣芽孢桿菌檢驗方法

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