肌球蛋白樹立結(jié)構(gòu)緊湊的創(chuàng)新性設(shè)計(jì)新標(biāo)準(zhǔn)
肌球蛋白輕鏈擁有自己的肽鏈，這點(diǎn)與重鏈不同。它們不被包括在肌球蛋白家族中，但對形成肌球蛋白酶催化超分子復(fù)合體有重要作用。
肌球蛋白是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的實(shí)驗(yàn)技術(shù)，由于抗原、抗體的反應(yīng)在一種固相載體-聚苯乙烯微量滴定板的孔中進(jìn)行，每加入一種試劑孵育后，可通過洗滌除去多余的游離反應(yīng)物，從而保證試驗(yàn)結(jié)果的特異性與穩(wěn)定性。肌球蛋白實(shí)際應(yīng)用中，通過不同的設(shè)計(jì)，具體的方法步驟可有多種。即：用于檢測抗體的間接法、用于檢測抗原的雙抗體夾心法以及用于檢測小分子抗原或半抗原的抗原競爭法等等。目前我們對客戶提供比較常用的ELISA雙抗體夾心法及ELISA間接法服務(wù)。肌球蛋白存在于橫紋肌肌原纖維的粗絲中，也存在于平滑肌中，在肌肉運(yùn)動中起重要作用，心肌細(xì)胞損傷越嚴(yán)重，血清CMLC水平越高。
肌球蛋白用緩沖液將抗體稀釋至1-10ug/ml。在反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 過夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，加一定稀釋的待檢樣品0.05ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌，同時(shí)做空白孔，陰性對照孔及陽性對照孔。肌球蛋白加酶標(biāo)抗體于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.05ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。肌球蛋白加底物液顯色于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。肌球蛋白終止反應(yīng)于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。肌球蛋白因其免疫學(xué)的特異性強(qiáng)，所以CMLC的測定是迄今為止診斷AMI和研究心肌損傷及保護(hù)較特異的生化指標(biāo)。
肌球蛋白結(jié)果判定可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號表示。也可測OD值：在ELISA檢測儀上，于450nm(若以ABTS顯色，則410nm)處，以空白對照孔調(diào)零后測各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍，即為陽性。肌球蛋白是肌肉結(jié)構(gòu)蛋白的一種，分子量480000，由兩條重鏈(分子量200 000)及四條輕鏈(兩條L2，分子量18 000，L1、L3分子量分別為16 000、25 000)組成，分子構(gòu)型如豆芽狀。兩條重鏈的大部分互相繞成雙螺旋狀，構(gòu)成豆芽的莖部；總鏈的其余部分與輕鏈一起構(gòu)成豆芽的豆瓣部分。
