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技術(shù)文章
IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測(cè)定
點(diǎn)擊次數(shù)：1797 發(fā)布時(shí)間：2011-5-23
IL-4拮抗IFN的抗病毒活性測(cè)定
IL-4能阻斷IFN對(duì)L929細(xì)胞的保護(hù)作用，其拮抗程度與IL-4濃度相關(guān)，據(jù)此可通過(guò)對(duì)L929細(xì)胞保護(hù)作用的抑制率來(lái)反映樣本中IL-4的含量。
（1）、取生長(zhǎng)良好的L929細(xì)胞傾去培養(yǎng)液，加入0．25％胰酶消化后，充分洗滌細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×105—3×105／mL，每孔加100uL，37℃，5％C02溫箱中培養(yǎng)24h。
（2）、采用9—10日齡雞胚，制備成纖維細(xì)胞單層培養(yǎng)，接種適量VSV病毒。當(dāng)細(xì)胞病變達(dá)+++—++++時(shí)，收獲病毒，并進(jìn)行病毒TCID50測(cè)定。
（3）、將待檢上清和rlL-4分別與4U／mL IFN混合，在L929細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)加100uL。37~C，5％C02溫箱中孵育24h。
（4）、VSV攻擊：每孔加100uL病毒懸液，含200TCID；置37℃，5％C02溫箱培養(yǎng)48h，待病毒對(duì)照孔病變達(dá)+++—++++，細(xì)胞對(duì)照正常時(shí)，測(cè)定結(jié)果。
（5）、將培養(yǎng)液全部倒出，用Hanks液洗3次；每孔加入100uL0．5％結(jié)晶紫染色液，染10—20rain棄去，Hanks液洗3次，加入95％酒精。放小型振蕩器上振搖15min左右，待細(xì)胞內(nèi)染料*溶解。用分光光度計(jì)540nm波長(zhǎng)測(cè)OD值，以準(zhǔn)確客觀地反映細(xì)胞存活數(shù)量。
（6）、注意事項(xiàng)：
①L929細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)條件不良時(shí)，可呈圓形漂浮狀，此時(shí)更換培養(yǎng)液可使其恢復(fù)為梭形貼壁細(xì)胞；
②L929細(xì)胞要均勻分散于培養(yǎng)板孔中，否則可能造成某個(gè)部位細(xì)胞過(guò)密，另一部分過(guò)稀，將影響細(xì)胞單層的形成。
（1）、取生長(zhǎng)良好的L929細(xì)胞傾去培養(yǎng)液，加入0．25％胰酶消化后，充分洗滌細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度至1×105—3×105／mL，每孔加100uL，37℃，5％C02溫箱中培養(yǎng)24h。
（2）、采用9—10日齡雞胚，制備成纖維細(xì)胞單層培養(yǎng)，接種適量VSV病毒。當(dāng)細(xì)胞病變達(dá)+++—++++時(shí)，收獲病毒，并進(jìn)行病毒TCID50測(cè)定。
（3）、將待檢上清和rlL-4分別與4U／mL IFN混合，在L929細(xì)胞培養(yǎng)內(nèi)加100uL。37~C，5％C02溫箱中孵育24h。
（4）、VSV攻擊：每孔加100uL病毒懸液，含200TCID；置37℃，5％C02溫箱培養(yǎng)48h，待病毒對(duì)照孔病變達(dá)+++—++++，細(xì)胞對(duì)照正常時(shí)，測(cè)定結(jié)果。
（5）、將培養(yǎng)液全部倒出，用Hanks液洗3次；每孔加入100uL0．5％結(jié)晶紫染色液，染10—20rain棄去，Hanks液洗3次，加入95％酒精。放小型振蕩器上振搖15min左右，待細(xì)胞內(nèi)染料*溶解。用分光光度計(jì)540nm波長(zhǎng)測(cè)OD值，以準(zhǔn)確客觀地反映細(xì)胞存活數(shù)量。
（6）、注意事項(xiàng)：
①L929細(xì)胞在營(yíng)養(yǎng)條件不良時(shí)，可呈圓形漂浮狀，此時(shí)更換培養(yǎng)液可使其恢復(fù)為梭形貼壁細(xì)胞；
②L929細(xì)胞要均勻分散于培養(yǎng)板孔中，否則可能造成某個(gè)部位細(xì)胞過(guò)密，另一部分過(guò)稀，將影響細(xì)胞單層的形成。