如何通過ABPP技術識別酶活性靶點？檢測技術服務詳情介紹

Activity-Based Protein Profiling（ABPP）技術，即基于活性位點的蛋白zhìzǔxué分析。通過特異性的小分子探針共價標記活性蛋白，ABPP能夠高效、準確地識別功能狀態下的酶類分子，為靶點發現和藥物機制研究提供了革命性的工具。

一、ABPP技術識別酶靶點的原理基礎

1、什么是“酶活性靶點”？

酶活性靶點是指在特定生理或病理條件下表現出功能狀態變化的酶類分子。例如，某種蛋白酶在癌癥組織中活性顯著增強，提示其可能在腫瘤發生中扮演關鍵角色。識別這些酶靶點，不僅有助于理解疾病機制，更為藥物設計提供具體方向。

2、ABPP的基本原理

ABPP技術的核心在于化學探針選擇性標記“活性”酶類蛋白。其基本組成包括：

（1）反應基團（Warhead）：識別酶活性位點并共價結合；

（2）連接臂（Linker）：調節探針結構穩定性；

（3）標簽（Tag）：用于捕獲與檢測，如shēngwùsù、熒光素、炔基等。

通過將這些探針加入到生物樣本中，ABPP可以專一性地捕獲具有催化功能的酶，并通過富集、酶解與LC-MS/MS分析，zuì終鎖定具體的“活性靶點”。

二、實驗流程詳解：如何通過ABPP篩選酶靶點？

Step 1：樣本制備與探針孵育

在細胞裂解液、組織勻漿或活細胞體系中加入設計好的ABP。該探針會與特定酶類的催化中心共價結合，僅標記處于活性狀態的酶。若研究藥物機制，需設置“藥物處理組”和“未處理對照組”，便于后續識別藥物抑制的靶標。

Step 2：蛋白富集與洗脫

探針所攜帶的標簽（如shēngwùsù）可通過磁珠（如streptavidin beads）實現目標蛋白的選擇性捕獲。經過多輪洗滌去除背景后，富集樣品中主要保留的即是活性酶類蛋白。

Step 3：酶解與質譜鑒定

捕獲到的蛋白樣品經yídànbáiméi（或LysC）酶解后，通過高分辨率LC-MS/MS平臺進行分析，可jīngzhǔn識別結合探針的肽段與蛋白身份。百泰派克采用Orbitrap Exploris 480質譜系統，結合優化的酶解與洗脫流程，可在低至μg級別樣本中檢測數千個功能酶類靶點。

Step 4：定量分析與靶點篩選

通過比對不同實驗組之間的酶活譜圖（如藥物處理組 vs 對照組），可識別出顯著下調（即被抑制）的酶類，提示其可能為藥物的直接或間接作用靶點。

三、ABPP靶點識別的優勢與適用場景

1、特異性高：只識別真正“在工作”的酶

不同于傳統表達組方法，ABPP可排除“死酶”或非催化狀態的假陽性信號。

2、可進行“前-后處理”比對

藥物、病理狀態等條件下的酶活譜可對比分析，便于篩選具有調控意義的活性靶點。

3、適配多種酶類與組織

通過選擇不同的Warhead，ABPP可覆蓋sīānsuān水解酶、半胱天冬酶、金屬蛋白酶、蛋白làoānsuān磷酸酶等多種酶類。

四、百泰派克的ABPP靶點識別服務亮點

在靶點發現、共價藥物機制驗證和疾病機制研究中，ABPP技術不再只是“看見”蛋白的存在，更是真正識別“活躍”的功能單元。通過科學設計實驗體系，配合高質量探針與優良質譜平臺，研究人員可以快速、jīngzhǔn、系統性地識別潛在酶活性靶點，為下游功能驗證與藥物開發奠定基礎。作為國內lǐngxiān的功能蛋白組學服務平臺，百泰派克生物科技在ABPP領域建立了涵蓋探針設計、樣本處理、高分辨質譜檢測與靶點分析的全流程服務體系，已廣泛服務于腫瘤學、藥物研發、免疫代謝等前沿領域。

百泰派克生物科技特色項目

一、蛋白測序

百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析，提供基于質譜的蛋白測序分析服務，包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析，Nduāncèxù，Cduāncèxù和全序列分析，以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì，提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務，對蛋白序列進行分析。

※服務優勢：

1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;

2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;

3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;

4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;

5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug，即可完成檢測;

6.測序不受N端封閉，PEC和和糖基化等N端修飾的影響。

二、蛋白zhìzǔxué

百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC，提供定量蛋白zhìzǔxué、bǎxiàngdàn白zhìzǔxué、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種蛋白zhìzǔxué分析服務。此外，百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4D蛋白zhìzǔxué服務，助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。

※服務優勢：

1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析，發現新的生物標記物;

2.體內體外多種dànbáizhì標記方法，適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;

3.質譜分析靈敏度高，實驗結果重復度高;

4.可檢測較低豐度蛋白，線性范圍廣;

5.zhuānyè生物信息學分析，分析更系統準確。

三、單細胞質譜流式技術分析

百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析，采用金屬元素標記物（通常是金屬元素標記的特異抗體）標記細胞表面和內部的分子，然后用流式細胞原理分離單個細胞，再用電感耦合等離子體質譜（ICP-MS）分析單個細胞的原子質量譜，zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。

※服務優勢：

1.技術優良，*技術空白

采用金屬標記抗體技術，避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征，百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。

2.分析數量大，成本較低

單細胞RNAseq受成本等因素限制，所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右，而流式質譜技術一次（單樣本）就可分析至少10^5的細胞，實現了數量級的提高，且成本不高于單細胞RNAseq。

3.應用前景大

①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化，在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景；

②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外，質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾；

③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。

四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現

百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析，可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究，旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案，深入挖掘未知的靶標。

五、生物藥物表征

百泰派克基于高分辨率質譜技術，MALDI TOF，高效色譜分離技術，提供一系列完善的生物藥物分析方案，從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析，到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務，幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。

百泰派克生物科技七大檢測平臺

百泰派克生物科技-生物制品表征，生物質譜多組學優質服務商

北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則，通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證，建立了完備的質量體系，數據冷熱/異地備份，設備定期計量/期間核查，軟件審計追蹤，為客戶提供一體化解決方案和技術服務，支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。

1.公司采用ISO9001質量控制體系，zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務；

2.獲國家CNAS實驗室認可，為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務；

3.業務范圍覆蓋蛋白zhìzǔxué、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等；

4.七大質量控制檢測平臺，滿足您一站式服務需求；

5.服務3000+企業，10000+客戶的選擇；

6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!

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