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免疫沉淀分析檢測技術服務詳情介紹
免疫沉淀分析(Immunoprecipitation, IP)是一種基于抗原-抗體特異性結合的技術,用于從復雜的生物樣品中分離和富集特定dànbáizhì或其復合物。該技術通過使用特異性抗體捕獲目標蛋白,再通過洗脫和檢測步驟,實現目標蛋白的分離和功能分析。該方法在分子生物學、dànbáizhì組學和生物醫學研究中應用廣泛,特別是在研究dànbáizhì相互作用、翻譯后修飾以及功能機制方面。作為一種靈活、有效的工具,免疫沉淀分析能夠針對特定的生物學問題設計實驗。例如,研究者可以利用這項技術驗證dànbáizhì間的相互作用,揭示信號通路中的關鍵節點;也可以通過檢測目標蛋白的翻譯后修飾狀態(如磷酸化、乙酰化等),深入了解其在調控細胞活動中的角色。此外,這項技術還是驗證其他高通量組學數據的重要手段,為生物分子功能的研究提供了可靠支持。作為dànbáizhì組學領域的技術先鋒,百泰派克生物科技提供全面的免疫沉淀分析服務,涵蓋從實驗設計、樣品處理到后續分析的完整流程。
一、免疫沉淀分析的技術原理與流程
免疫沉淀分析的核心是抗體與目標蛋白之間的特異性結合,利用抗體分子的一端與目標蛋白的抗原表位結合,另一端則通過結合介質(如蛋白A/G磁珠或瓊脂糖珠)實現分離操作。具體流程包括以下步驟:
1、樣品制備
將生物樣品(如細胞裂解液、組織勻漿)處理成可溶性狀態,確保目標蛋白保持天然構象和生物學活性;為了提高分析的準確性,樣品裂解和處理過程中需避免dànbáizhì的降解和修飾丟失。
2、抗體結合
將特異性抗體加入樣品中,利用其高親和性識別目標蛋白。選擇合適的抗體(單克隆或多克隆)對實驗結果至關重要,抗體的特異性和敏感性直接決定了目標蛋白的捕獲效率。
3、免疫復合物富集
通過結合介質將抗體-目標蛋白復合物從樣品中分離出來。蛋白A或G珠子與抗體Fc段結合,通常作為分離手段的一部分,利用離心或磁分離去除未結合的樣品組分。
4、洗滌和洗脫
使用適當的緩沖液清洗免疫復合物,以去除非特異性結合的成分,隨后通過變性緩沖液或其他試劑將目標蛋白從抗體上洗脫下來。
5、檢測與分析
分離后的目標蛋白可通過SDS-PAGE和Western Blot檢測其表達情況,也可以進一步進行質譜分析以研究其修飾狀態或相互作用分子。
二、應用場景及意義
免疫沉淀分析的應用涵蓋了多種研究領域。例如:
1、dànbáizhì相互作用研究
通過共免疫沉淀(Co-IP),研究者可以驗證兩種或多種dànbáizhì在細胞內是否存在相互作用,這對解析信號通路中的調控網絡具有重要意義。
2、翻譯后修飾檢測
利用特異性修飾抗體(如磷酸化或乙酰化抗體),免疫沉淀分析能夠富集修飾狀態的dànbáizhì,揭示調控信號的節點。
3、dànbáizhì復合物組成分析
通過免疫沉淀富集復合物中的一個關鍵蛋白,結合質譜技術,可解析復合物的組成,進一步理解其功能。
4、靶蛋白鑒定與驗證
在藥物開發中,免疫沉淀常被用于驗證潛在藥物靶點的表達和狀態,為藥物研發提供直接證據。
三、注意事項與常見問題
免疫沉淀分析的成功與實驗設計和操作細節密切相關。首先,抗體選擇是實驗的關鍵,應確保其具有高特異性和低背景噪聲。其次,樣品處理過程中需避免dànbáizhì降解,加入蛋白酶抑制劑是常見的預防措施。此外,非特異性結合可能導致背景信號增高,可通過優化洗滌條件和緩沖液組成加以改進。zuì后,定量分析時需特別注意實驗重復性和抗體的定量能力。
百泰派克生物科技提供免疫共沉淀法(CO-IP)dànbáizhì相互作用分析服務,我們的zhuānyè團隊經驗豐富,能夠根據客戶需求定制高效的解決方案,無論是dànbáizhì相互作用驗證、翻譯后修飾研究,還是靶點驗證,都能為您的研究提供jīngzhǔn支持。
百泰派克生物科技特色項目
一、蛋白測序
百泰派克生物科技使用Thermo公司新推出的Obitrap Fusion Lumos質譜儀及島津公司埃德曼降解測序系統對dànbáizhì序列進行分析,提供基于質譜的蛋白測序分析服務,包括對dànbáizhì的氨基酸組成分析,Nduāncèxù,Cduāncèxù和全序列分析,以及基于埃德曼降解的dànbáizhìN端序列分析服務。對于未知理論序列的dànbáizhì,提供基于從頭測序法的dànbáizhì從頭測序服務,對蛋白序列進行分析。
※服務優勢:
1.采用目前世界上優良的質譜儀器 Obitrap Fusion Lumos;
2.可實現對所測定靶蛋白序列 100% 的覆蓋;
3.可測定蛋白N端多達 70個氨基酸序列;
4.可測定多種形式的樣品: 蛋白溶液、PVDF 蛋白條帶;
5.樣品用量低: 蛋白樣品僅需 5-10ug,即可完成檢測;
6.測序不受N端封閉,PEC和和糖基化等N端修飾的影響。
二、dànbáizhì組學
百泰派克生物科技采用Thermo Fisher的Orbitrap Fusion Lumos質譜平臺結合Nano-LC,提供定量dànbáizhì組學、靶向dànbáizhì組學、多肽組學、翻譯后修飾蛋白組學等多種dànbáizhì組學分析服務。此外,百泰派克生物科技新推出基于timsTOF Pro的4Ddànbáizhì組學服務,助力微量樣本蛋白組學、大樣本群醫學及高通量修飾組學等研究工作。
※服務優勢:
1 .高通量定量蛋白分析:多對照組大規模實驗分析,發現新的生物標記物;
2.體內體外多種dànbáizhì標記方法,適用于分析組織、細胞、血液等多種樣品;
3.質譜分析靈敏度高,實驗結果重復度高;
4.可檢測較低豐度蛋白,線性范圍廣;
5.zhuānyè生物信息學分析,分析更系統準確。
三、單細胞質譜流式技術分析
百泰派克生物科技采用Fluidigm質譜流式系統進行單細胞質譜流式技術分析,采用金屬元素標記物(通常是金屬元素標記的特異抗體)標記細胞表面和內部的分子,然后用流式細胞原理分離單個細胞,再用電感耦合等離子體質譜(ICP-MS)分析單個細胞的原子質量譜,zuì后將原子質量譜數據轉換為細胞表面和內部的信號分子表達量。
※服務優勢:
1.技術優良,*技術空白
采用金屬標記抗體技術,避免了傳統流式熒光通道少且易相互影響的問題。可在單細胞層面上對多種指標同時進行表征,百泰派克生物科技可做到同時檢測51個目標蛋白。
2.分析數量大,成本較低
單細胞RNAseq受成本等因素限制,所有樣本細胞匯總的分析數目一般在2x10^4個左右,而流式質譜技術一次(單樣本)就可分析至少10^5的細胞,實現了數量級的提高,且成本不高于單細胞RNAseq。
3.應用前景大
①流式質譜結果可以給出細胞亞群的變化,在臨床診斷、疾病機制研究等方面具有極大的研究前景;
②將金屬標簽技術與其他技術結合會有新應用方向。除常規蛋白外,質譜流式細胞技術還可用于蛋白翻譯后修飾;
③可檢測細胞存活率、細胞大小、mRNA轉錄子表達量、DNA合成速率以及蛋白酶活性等。
四、基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現
百泰派克生物科技的基于高精度質譜的免疫多肽組學分析及新抗原發現一站式解決方案包括我們專有的、高度敏感的免疫肽富集和鑒定方案。我們能夠幫助您實現10,000個以上I型多肽和10,000個以上II型多肽的鑒定和識別。通過我們優化的高通量免疫多肽組學分析平臺進行免疫肽組學分析,可從zuì小的樣品材料中進行可重復的識別和定量。該服務可以應用于大規模的研究,旨在助力科研工作者尋找癌癥、免疫疾病及傳染病的解決方案,深入挖掘未知的靶標。
五、生物藥物表征
百泰派克基于高分辨率質譜技術,MALDI TOF,高效色譜分離技術,提供一系列完善的生物藥物分析方案,從dànbáizhì、多肽、抗體、疫苗等生物制品的氨基酸組成和一級結構分析,到產品變異性和純度分析。旨在提供優質生物藥物分析服務,幫助生物醫藥生產商提高生物藥物品質。
百泰派克生物科技七大檢測平臺
百泰派克生物科技-生物制品表征,生物質譜多組學優質服務商
北京百泰派克生物科技有限公司致力于為生物/制藥和醫療器械行業提供質量控制檢測和項目驗證等zhuānyè服務。公司實驗室遵循NMPA、ICH、FDA和EMA等的法規和指導原則,通過CNAS/ISO9001雙重質量體系認證,建立了完備的質量體系,數據冷熱/異地備份,設備定期計量/期間核查,軟件審計追蹤,為客戶提供一體化解決方案和技術服務,支持新藥研發、藥物申報注冊和生產放行。
1.公司采用ISO9001質量控制體系,zhuānyè提供以質譜為基礎的CRO檢測分析服務;
2.獲國家CNAS實驗室認可,為客戶提供符合全球藥政法規的藥物質量研究服務;
3.業務范圍覆蓋dànbáizhì組學、多肽組學、代謝組學、生物藥物表征、單細胞分析、單細胞質譜流式、生信云分析以及多組學生物質譜整合分析等;
4.七大質量控制檢測平臺,滿足您一站式服務需求;
5.服務3000+企業,10000+客戶的選擇;
6.致力于為您提供優質的生物質譜分析服務!