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在線脫鹽高通量液質聯用分析寡核苷酸

閱讀:430      發布時間:2020-06-19
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    寡核苷酸是一類短鏈核苷酸的總稱(包括脫氧核糖核酸及核糖核酸),如用于基因擴增和基因診斷的PCR引物和反義核酸,介導基因沉默的小干擾RNA ( small interfering RNA,siRNA) 等,努力研究開發基因靶向治療藥物用于治療病毒、腫瘤和遺傳疾病。天然的寡核苷酸在體內容易降解,穩定性差。通過修飾的寡核苷酸具有較好的藥學特性和體內穩定性12,但合成的寡核苷酸產物含有各種雜質,需純化精制,產物的鑒定和產品的質量控制至關重要。液相和液質聯用于寡核苷酸目標產物的高分辨分離和鑒定,可以判斷待測寡核苷酸結構的變化,比如脫嘌呤、氧化、磷酸化等。寡核苷酸樣品中存在的鹽分會影響其離子化過程和造成峰強度降低,因此有必要進行質譜鑒定前的除鹽處理。常規離線除鹽方法耗時;可以利用在線除鹽方式進行寡核苷酸的分離鑒定,但樣品通量需要提高,以滿足高通量的要求,如平均每天2000個樣品的需求等。

    本工作中,我們利用閥切換技術對寡核苷酸樣品進行在線除鹽,建立簡單、快速、高效的超高效液相色譜線性離子阱質譜儀( Vanquish Duo-LTQ XL )在線除鹽和寡核苷酸分子量
測定的分析方法。
 

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