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HEK293細胞的特點與應用2023/02/21

HEK293細胞的特點和應用人胚腎293(HEK293)細胞是生物技術和研究中常用的細胞系之一。由于HEK293細胞具有較高的生長效率，通常生成用于生物醫學和藥物研究的外源性蛋白質。HEK293細胞也會被用于各種轉染實驗中。HEK293細胞起源和背景人胚腎293細胞AlexVanderEb在1970年代時培養出了HEK293細胞系。為了產生永生化細胞系，Graham將5型腺病毒的DNA轉染到HEK細胞的人類19號染色體中。Ad5整合到細胞基因組中導致細胞凋亡的預防，從而導致細胞系的連續產生。在獲

購買細胞常見問題匯總2023/02/16

購買細胞常見問題匯總購買細胞收到細胞前，應做哪些準備工作？購買細胞應具有一定細胞培養知識與經驗，并具備基本實驗設備，如細胞培養實驗室、超凈工作臺、CO2培養箱，倒置顯微鏡等；還應準備好相應的細胞無菌培養基、血清、雙抗、細胞培養瓶、培養板、移液管等。購買的細胞收到細胞后，應該怎么操作？1.觀察細胞瓶是否完好，培養液是否有漏液、渾濁等現象。若有，請及時與技術支持聯系；2.用75%酒精擦拭細胞瓶表面，顯微鏡下觀察細胞狀態。因運輸問題，部分貼壁細胞會有少量從瓶壁脫落，將細胞置于細胞培養箱內靜置培養，隔天

降低CHO細胞培養中的乳酸水平的解決方案2023/02/16

乳酸是CHO細胞補料分批培養的主要副產品之一。在pH控制的生物反應器中，由于添加堿以控制細胞培養基的pH值，高水平乳酸的積累伴隨著高滲透壓，可能導致制造細胞生長緩慢，甚至大量凋亡，同時產生抗體蛋白的產量也降低不少。而乳酸脫氫酶(LDH)是一種催化底物丙酮酸轉化為乳酸的酶，包括丙酮酸濃度在內的許多因素都會調節LDH活性。乳酸脫氫酶對代謝產物的影響在一項研究中，科學家們曾嘗試敲低乳酸脫氫酶A(LDHa)和PDHK的基因表達，以研究對乳酸代謝和蛋白質生產的影響。他們發現，使用攜帶LDHa和PDHK的小

DNA克隆技術概述2023/02/16

當您聽到“克隆”一詞時，您可能會想到克隆整個生物體，例如綿羊多利。然而，克隆某物的全部意思就是制作它的基因精確副本。在分子生物學實驗室中，常被克隆的是基因或其他小片段DNA稱為DNA克隆。DNA克隆技術概述DNA克隆技術其實就是基因編輯，是指制作特定DNA片段的多個相同副本的過程。在典型的DNA克隆過程中，通常會將目的的基因或其他DNA片段插入稱為質粒的環狀DNA片段中。插入是使用“剪切和粘貼”DNA的酶完成的，它會產生一個重組DNA分子，或由多個來源的片段組裝而成的DNA。質粒DNA的環狀片段

實驗室儀器可以自校準嗎？2023/02/15

實驗室移液槍、實驗室天平、PH計等實驗室儀器使用一段時間后，需要對其進行校準，那么實驗室儀器可以自校準嗎？小編帶你了解一下：內部校準與自校準的區別“自校準”一般是利用測量設備自帶的校準程序或功能（比如智能儀器的開機自校準程序）或設備廠商提供的沒有溯源證書的標準樣品進行的校準活動，通常情況下，其不是有效的量值溯源活動，但特殊領域另有規定除外。“內部校準”是指在實驗室或其所在組織內部實施的，使用自有的設施和測量標準，校準結果僅用于內部需要，為實現獲認可的檢測活動相關的測量設備的量值溯源而實施的校準。

DNA重組實驗技術總結2023/02/15

DNA重組技術，是分子的生物學研究生需要掌握的實驗技術之一，DNA重組實驗方法總結如下：一、實驗目的體外連接獲得重組分子，用于轉化受體細胞。二、實驗原理DNA重組技術是用內切酶分別將載體和外源DNA切開，經分離純化后，用連接酶將其連接，構成新的DNA分子。外源DNA片段和質粒載體的連接反應策略有以下幾種：1、帶有非互補突出端的片段用兩種不同的限制性內切酶進行消化可以產生帶有非互補的粘性末端，這也是最容易克隆的DNA片段，一般情況下，常用質粒載體均帶有多個不同限制酶的識別序列組成的多克隆位點，因而

PCR儀使用參數設定注意事項2023/02/15

PCR儀使用參數設定注意事項PCR儀使用參數設定不正確會影響到PCR實驗結果，這主要表現在溫度、時間和循環次數上，如果溫度參數設置過高，延伸時間不夠都會對實驗結果造成影響，下面談談使用PCR儀參數設定時的注意事項：一、溫度和時間溫度與時間的設置：基于PCR原理三步驟而設置變性-退火-延伸三個溫度點。在標準反應中采用三溫度點法，雙鏈DNA在90～95℃變性，再迅速冷卻至40～60℃，引物退火并結合到靶序列上，然后快速升溫至70～75℃，在TaqDNA聚合酶的作用下，使引物鏈沿模板延伸。對于較短靶基

一種通過改造CHO 細胞提升抗體產量的新技術2023/02/15

丙酮酸羧化酶是細胞質和線粒體代謝途徑的重要元素，可以有效促進能量代謝。在CHO細胞中過表達酵母胞質丙酮酸羧化酶(PYC2)，可以增加丙酮酸流向TCA循環。增強的PYC2表達導致丙酮酸通量增加，從而使乳酸積累減少多達4倍，并顯著增加細胞密度和培養壽命。有了這個結果，與親本細胞相比，工程細胞的抗體表達顯著提高了70%，產品質量也有所提高（約3倍）。通過PYC2工程改造提升細胞性能，在丙酮酸、葡萄糖、乳酸和細胞能量代謝方面具有均高于親代細胞的各種優勢。PYC2工程改造原理和方法在補料分批上游工藝中，產

核酸酶切反應原理及注意事項2023/02/14

A載體和外源DNA的酶切一、實驗目的學習和掌握核酸的酶切操作原理；通過酶切獲得可進行體外重組的載體和外源DNA。二、實驗原理限制性內切酶能特異地結合于一段被稱為限制性酶識別序列的DNA序列之內或其附近的特異位點上，并切割雙鏈DNA。絕大多數限制酶識別長度為4至6個核苷酸的回文對稱特異核苷酸序列(如EcoRⅠ識別六個核苷酸序列：5'-G↓AATTC-3')，有少數酶識別更長的序列或簡并序列。Ⅱ類酶切割位點在識別序列中，有的在對稱軸處切割，產生平末端的DNA片段(如SmaⅠ:5'-CCC↓GGG-3

質粒DNA的提取實驗方法和步驟2023/02/14

質粒DNA的提取實驗方法和步驟一、實驗目的通過本實驗學習和掌握堿裂解法提取質粒的原理和步驟。二、實驗原理從細菌中分離質粒DNA的方法都包括3個基本步驟：培養細菌使質粒擴增；收集和裂解細胞：分離和純化質粒DNA。采用溶菌酶可以破壞菌體細胞壁，十二烷基磺酸鈉(SDS)和TritonX-100可使細胞膜裂解。經溶菌酶和SDS或TritonX-100處理后，細菌染色體DNA會纏繞附著在細胞碎片上，同時由于細菌染色體DNA比質粒大得多，易受機械力和核酸酶等的作用而被切斷成不同大小的線性片段。堿裂解法提取質

PCR反應的基本原理與實驗技術2023/02/14

一、實驗目的：掌握PCR反應的基本原理與實驗技術二、PCR反應實驗原理PCR(PolymeraseChainReaction)-聚合酶鏈式反應，可以選擇性擴增一段DNA序列。其基本步驟是，首先將待擴增的模板DNA變性使之成為單鏈，DNA樣品中，特異性的引物能夠與其互補的序列雜交，在dNTPs和Taq酶存在時，就可以合成模板DNA的互補鏈，反應完成后，將反應混合物加熱使DNA雙鏈變性，溫度下降后，過量的引物又可以開始第二輪的合成反應。這種延伸-變性-退火-延伸的循環可以重復多次，使所需要的DNA片

瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法2023/02/14

一、實驗目的：通過本實驗學習瓊脂糖凝膠電泳檢測DNA的方法和技術。二、實驗原理DNA分子在瓊脂糖凝膠中泳動時有電荷效應和分子篩效應。DNA分子在高于等電點的pH溶液中帶負電荷在電場中向正極移動。由于糖－磷酸骨架在結構上的重復性質，相同數量的雙鏈DNA幾乎具有等量的凈電荷，因此他們能以相同的速度向正極方向移動。在一定的電場強度下，DNA分子的遷移速度取決于分子篩效應，即DNA分子本身的大小和構型。具有不同的相對分子質量的DNA片段泳動速度不一樣，可進行分離。DNA分子的遷移速度與相對分子質量對數值

病毒純化方法2023/02/14

病毒是一類非細胞型生物，需要寄生在其活細胞體內，雖然大部分病毒對人體是有害的，但是隨著科學的發展，發現很多病毒有較高的利用價值。例如：可以作為基因工程載體的慢病毒、腺相關病毒等；還有噬菌體展示技術，可以幫助我們對蛋白質進行相關研究；以及曾作為細胞融合應用的仙臺病毒；而病毒最重要的應用，就是用來制備滅活、減毒、亞單位疫苗。本期，我們主要對病毒疫苗生產過程中的純化方法進行介紹。病毒提純是病毒學研究的重要前提，病毒的相關詳細研究都需要高純度的病毒樣品。病毒純化是在病毒不受損、不失活的前提下使用一些物理

分光光度計選購指南2023/02/13

光譜儀或分光光度計是用于識別或確認樣品中物質的化學種類、化學結構或濃度的分析儀器。分光光度計將發射能量源通過溶液并測量不同波長的光強度。若溶液的分子濃度較高，則可能會吸收更多的光。所以，提交用于光譜分析的樣品必須非常純凈，以避免產生不良或受污染的結果。分光光度計主要由激發光源、濾光片、比色皿，以及光信號檢測器所組成。選擇合適的分光光度計/光譜儀時要考慮的重要標準：檢測限制您要測量的產品的密度、形狀或尺寸波長范圍分析工作范圍樣品通量（單樣品與多樣品）數據質量儀器和相關消耗品的成本可定制和/或預配置

動物細胞培養生物反應器中乳酸含量的控制方法2023/02/13

銨產量過多、乳酸產量過剩、營養限制或與營養補給、添加堿以控制pH值相關的高滲應激等因素，使得動物細胞培養生物反應器中的細胞密度被限制。為了部分克服這些因素，使用乳酸補充和適應LSA技術是減少銨和乳酸產生的一種簡單方法。使用這種簡單的方法，可以實現了將近乳酸產量的大幅度減少，同時在分批搖瓶培養中減少了50%的銨產量。在隨后的補料分批生物反應器培養中，使用BiosenC-Line乳酸分析儀測定乳酸產量減少了近8八倍。甚至可以實現3500萬個細胞/mL的活細胞密度和2.73億個細胞-天/mL的完整活細

如何選擇移液槍移液吸頭2023/02/13

如何選擇移液槍移液吸頭如何選擇實驗室移液吸頭?任何移液器，其性能和精確度都會因使用質量不佳或不合適的吸頭而受到嚴重影響。移液器和移液器吸頭作為一個系統，只有互相匹配才能保證準確地轉移和輸送液體。在掌握正確的移液技術后，匹配推薦的吸頭，就能保證移液的精度。一般分為：①袋裝吸頭、②盒裝吸頭、③低吸附吸頭、④濾芯吸頭、⑤自動化吸頭等。透明吸頭VS.有色吸頭當前，市場上吸頭基本上都是用聚丙烯塑料（化學惰性高，使用溫度范圍廣的無色透明塑料）做的。不過，同樣是聚丙烯，品質差別也會很大：高品質的吸頭一般都是用

紫外可見分光光度計使用注意事項2023/02/10

紫外可見光譜分析技術是一種廣泛應用于許多科學領域的技術，從細菌培養、藥物鑒定和核酸純度檢查和定量，到飲料行業的質量控制和化學研究?？梢姽庾V是一種分析技術，它測量與參考或空白樣品相比樣品吸收或透射過的UV或可見光的離散波長的數量。此屬性受樣品成分的影響，分析結果可能會提供有關樣品中成分和濃度的信息。人類能夠看到一系列可見光，從大約380nm（我們看到的紫色）到780nm（我們看到的紅色）。紫外光的波長比可見光短，約為100nm。因此，光可以通過其波長來描述，這在紫外可見光譜中可用于通過定位與吸光度

實驗室電子天平的使用及維護方法2023/02/10

實驗室電子天平的使用及維護方法實驗室電子天平主要用于實驗過程中的樣品稱量、樣品制備等過程。使用及維護方法如下：1.實驗室電子天平的使用條件稱量臺：穩固的實驗臺或石臺，不得用鐵板制品、塑料和玻璃制品的材料工作室：只有一個出入口，防止空氣對流；窗戶數量盡量少，避免陽光直射溫濕度：溫度要求15-30℃，并盡可能保持穩定；濕度30-65%RH，盡量保持在50%RH空氣：避免空調或風扇直吹天平，并避免將調溫、除濕設施安放于天平附近2.實驗室電子天平操作注意事項調平：使用天平前應首先檢查氣泡是否在水平儀的中

使用實驗室儀器進行小鼠抗體生產技術2023/02/10

小鼠抗體是科研實驗中常用的一種抗體，它主要有IgA、IgD、IgE、IgG和IgM五種類型，下面小編就小鼠抗體分類及使用實驗室儀器進行小鼠抗體生產技術做一下簡單介紹：小鼠抗體同種型/類、亞類和小鼠抗體同種型與人類相同，小鼠有五種抗體同種型（IgA、IgD、IgE、IgG和IgM）。每個同種型都有不同的重鏈。同種型也稱為類?？贵w的另一個名稱是免疫球蛋白，因此后綴“Ig”表示抗體類別和亞類。幼稚B細胞產生IgM和IgD。在B細胞成熟過程中，通過同種型轉換，成熟的B細胞將產生IgG、IgA或IgE同種

使用微載體生物反應器規模化擴增 Vero 細胞的方法2023/02/10

絕大多數貼壁Vero細胞擴增培養都是使用微載體技術在攪拌式細胞生物反應器中進行的。在這里，細胞附著在微載體上，微載體被設計成在攪拌培養中保持懸浮。微載體的種類很多，主要分為固體和大孔兩種，表面性質不同。幾項研究比較了不同類型的微載體用于Vero細胞的繁殖.目前多數使用Cytodex1微載體.Cytodex1微載體是基于葡聚糖的固體微載體，顯示帶電表面，平均直徑為180μm左右。近年來，國內生產的DISKS片狀載體孔徑只有15μm，單層厚度約0.44mm,可以維持較好的營養物質交換環境，并且減少細