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BD 流式細胞儀是集激光技術(shù)、電子物理、光電測量、計算機及細胞熒光化學技術(shù)于一體的多參數(shù)細胞分析儀器，廣泛應(yīng)用于生命科學研究和臨床診斷領(lǐng)域。其核心功能是通過液流系統(tǒng)將細胞或微粒排列成單列，依次通過激光束檢測點，利用光學系統(tǒng)激發(fā)熒光標記物并捕獲散射光與熒光信號，最終通過電子系統(tǒng)將光信號轉(zhuǎn)換為數(shù)字信號進行多維度分析。
其液流系統(tǒng)由鞘液管、樣品管和噴嘴組成，通過流體動力學聚焦使細胞懸浮液形成直徑約3-10μm的穩(wěn)定液柱，確保每個細胞獨立通過激光檢測區(qū)。光學系統(tǒng)采用氬離子激光器（488nm）或氪離子激光器（647nm），激發(fā)細胞表面或內(nèi)部的熒光染料（如FITC、PE）。前向散射光（FSC）反映細胞體積，側(cè)向散射光（SSC）揭示胞內(nèi)顆粒結(jié)構(gòu)，而熒光信號強度則對應(yīng)標記抗原或核酸的濃度。光電倍增管（PMT）將光信號轉(zhuǎn)換為電脈沖，經(jīng)模數(shù)轉(zhuǎn)換后生成FCS格式數(shù)據(jù)文件。
BD 流式細胞儀在實驗前準備：
1、儀器校準與質(zhì)檢
開機預(yù)熱：提前30分鐘開機，使激光和檢測系統(tǒng)穩(wěn)定。
光路校準：使用標準熒光微球（如Flow Check或CytoGlow）調(diào)整激光延遲、靈敏度及PMT電壓，確保液流居中。
檢查背景噪聲：運行緩沖液（如PBS），確保散射光和熒光通道的基線平穩(wěn)，無異常信號。
2、樣本制備
細胞濃度：調(diào)整細胞濃度至5×10?~1×10?cells/mL（過高易導致堵塞，過低降低檢測效率）。
單細胞懸液：機械法（研磨）或酶消化法（如膠原酶）處理組織，過濾去除團塊。
3、染色與孵育：
表面抗體：4℃避光孵育15~30分鐘，PBS洗滌后重懸。
胞內(nèi)染色：破膜劑（如BD Fix&Perm）處理后孵育胞內(nèi)抗體。
活性染料：如PI（死細胞染色）或Calcein-AM（活細胞標記）。
4、對照設(shè)置：
空白對照：未染色的細胞用于確定熒光閾值。
單標對照：單個熒光標記的樣本用于調(diào)整補償（Compensation）。
同型對照：用于排除非特異性結(jié)合（如ISO型抗體）。
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