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供貨周期	現貨	規格	T25培養瓶x1 1.5ml凍存管x2
貨號	BFN608007148	應用領域	醫療衛生,生物產業
主要用途	僅供科研

細胞名稱	WRL68人正常肝細胞
貨物編碼	BFN608007148
產品規格	T25培養瓶x1	1.5ml凍存管x2
細胞數量	1x10^6	1x10^6
保存溫度	37℃	-198℃
運輸方式	常溫保溫運輸	干冰運輸
安全等級	1
用途限制	僅供科研用途 1類

培養體系	DMEM高糖培養基（Hyclone）+10%胎牛血清（Gibco）+1%雙抗（Hyclone）
培養溫度	37℃	二氧化碳濃度	5%
簡介	該細胞取自30歲女性白人供體。近年文獻顯示，該細胞源頭可能被HELA污染，請各位學者注意。
注釋
STR信息	Amelogenin X CSF1PO 9,10 D5S818 11,12 D7S820 8,12 D13S317 12,13.3 (ATCC) 12,14 (ECACC) D16S539 9,10 TH01 7 TPOX 8,12 vWA 16,18
參考文獻	Patent=CA999546A Apostolov K. Human liver cell line. Patent number CA999546A, 09-Nov-1976 Patent=US3935066 Apostolov K. Cell lines. Patent number US3935066, 27-Jan-1976 PubMed=8389256; DOI=10.1093/carcin/14.5.987 Hsu I.C., Tokiwa T., Bennett W., Metcalf R.A., Welsh J.A., Sun T., Harris C.C. p53 gene mutation and integrated hepatitis B viral DNA sequences in human liver cancer cell lines. Carcinogenesis 14:987-992(1993) PubMed=7522099; DOI=10.1007/BF02634356 Gutierrez-Ruiz M.C., Bucio L., Souza V., Gomez J.J., Campos C., Carabez A. Expression of some hepatocyte-like functional properties of WRL-68 cells in culture. In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. 30:366-371(1994) PubMed=20143388; DOI=10.1002/ijc.25242 Capes-Davis A., Theodosopoulos G., Atkin I., Drexler H.G., Kohara A., MacLeod R.A.F., Masters J.R.W., Nakamura Y., Reid Y.A., Reddel R.R., Freshney R.I. Check your cultures! A list of cross-contaminated or misidentified cell lines. Int. J. Cancer 127:1-8(2010)

驗收細胞注意事項

1、收到WRL68人正常肝細胞，請查看瓶子是否有破裂，培養基是否漏出，是否渾濁，如有請盡快聯系。

2、收到WRL68人正常肝細胞，如包裝完好，請在顯微鏡下觀察細胞。,由于運輸過程中的問題，細胞培養瓶中的貼壁細胞有可能從瓶壁中脫落下來，顯微鏡下觀察會出現細胞懸浮的情況，出現此狀態時，請不要打開細胞培養瓶，應立即將培養瓶置于細胞培養箱里靜止 3-5 小時左右，讓細胞先穩定下，再于顯微鏡下觀察，此時多數細胞會重新貼附于瓶壁。如細胞仍不能貼壁，請用臺盼藍染色法鑒定細胞活力，如臺盼藍染色證實細胞活力正常請按懸浮細胞的方法處理。

3、收到WRL68人正常肝細胞后，請鏡下觀察細胞，用恰當方式處理細胞。若懸浮的細胞較多，請離心收集細胞，接種到一個新的培養瓶中。棄掉原液，使用新鮮配制的培養基，使用進口胎牛血清。剛接到細胞，若細胞不多時血清濃度可以加到 15％去培養。若細胞迏到 80%左右，血清濃度還是在 10％。

4、收到WRL68人正常肝細胞時如無異常情況，請在顯微鏡下觀察細胞密度，如為貼壁細胞，未超過80%匯合度時，將培養瓶中培養基吸出，留下 5-10ML 培養基繼續培養：超過 80%匯合度時，請按細胞培養條件傳代培養。如為懸浮細胞，吸出培養液，1000 轉/分鐘離心 3 分鐘，吸出上清，管底細胞用新鮮培養基懸浮細胞后移回培養瓶。

5、將培養瓶置于 37℃培養箱中培養，蓋子微微擰松。吸出的培養基可以保存在滅菌過的瓶子里，存放于 4℃冰箱，以備不時之需。

6、24 小時后，WRL68人正常肝細胞形態已恢復并貼滿瓶壁，即可傳代。（貼壁細胞）將培養瓶里的培養基倒去，加 3-5ml（以能覆蓋細胞生長面為準）PBS 或 Hanks’液洗滌后棄去。加 0.5-1ml 0.25%含 EDTA 的胰酶消化，消化時間以具體細胞為準，一般 1-3 分鐘，不超過 5 分鐘。可以放入37℃培養箱消化。輕輕晃動瓶壁，見細胞脫落下來，加入 3-5ml 培養基終止消化。用移液管輕輕吹打瓶壁上的細胞，使之*脫落，然后將溶液吸入離心管內離心，1000rpm/5min。棄上清，視細胞數量決定分瓶數，一般一傳二，如細胞量多可一傳三，有些細胞不易傳得過稀，有些生長較快的細胞則可以多傳幾瓶，以具體細胞和經驗為準。（懸浮細胞）用移液管輕輕吹打瓶壁，直接將溶液吸入離心管離心即可。

7、貼壁細胞，懸浮細胞。嚴格無菌操作。換液時，換新的細胞培養瓶和換新鮮的培養液，37℃，5%CO2 培養。

特別提醒： 原瓶中培養基不宜繼續使用，請更換新鮮培養基培養。

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