SURE感受態(tài)細(xì)胞
SURE Chemically Competent Cell
                

SURE感受態(tài)細(xì)胞基因型：
E. coli B e14^-(McrA^-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kan^r) uvrC [F´ proAB lacI^qZΔM15 Tn10 (Tet^r)].
SURE感受態(tài)細(xì)胞簡(jiǎn)要說(shuō)明：
真核生物DNA存在較多“十字型” 、“Z字型” 等二級(jí)或三級(jí)結(jié)構(gòu)，這種DNA結(jié)構(gòu)在利用傳統(tǒng)大腸桿菌進(jìn)行克隆時(shí)易被大腸桿菌體內(nèi)的重組酶系統(tǒng)或其他防御系統(tǒng)識(shí)別并對(duì)其進(jìn)行重組，刪除等破壞，導(dǎo)致很難對(duì)這類(lèi)DNA進(jìn)行正確的克隆操作。CMbio SURE菌株可以解決這些問(wèn)題：此菌株體內(nèi)重組酶系統(tǒng)整條通路被破壞，并且(McrA-, McrCB-, McrF-, Mrr-, HsdR-) 這些限制性突變的存在賦予此菌株無(wú)法對(duì)外源DNA進(jìn)行標(biāo)記、限制的能力，提高了外源甲基化DNA的克隆效率，同時(shí)具有核酸酶(endA)突變、重組酶 (recB recJ)突變，增強(qiáng)了外源DNA的穩(wěn)定性。存在于F´因子上的lacIqZΔM15基因使此菌株可以進(jìn)行藍(lán)白斑篩選；Kan^r，Tet^r賦予菌株卡那霉素和四環(huán)素抗性。SURE感受態(tài)細(xì)胞由特殊工藝制作，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測(cè)轉(zhuǎn)化效率達(dá)5×10⁸cfu/μg。
SURE感受態(tài)細(xì)胞操作說(shuō)明：

1. CMbio SURE感受態(tài)細(xì)胞放置冰中融化（或放手心或室溫片刻，待菌體處于冰水混合狀態(tài)時(shí)迅速插入冰中），加入目的DNA（質(zhì)粒或連接產(chǎn)物）并用手EP管底輕輕混勻，冰上靜置25分鐘。

2. 42℃水浴熱激45秒，迅速放回冰上并靜置2分鐘，晃動(dòng)會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。

1.  向離心管中加入700μl不含抗生素的無(wú)菌培養(yǎng)基（2YT或LB），混勻后37℃，200rpm復(fù)蘇60分鐘。

4. 5000rpm離心一分鐘收菌，留取100μl左右上清輕輕吹打重懸菌塊并涂布到含相應(yīng)抗生素的2YT或LB培養(yǎng)基上。
5. 將平板倒置放于37℃培養(yǎng)箱過(guò)夜培養(yǎng)。
SURE感受態(tài)細(xì)胞注意事項(xiàng)：

1.  CMbio 感受態(tài)細(xì)胞在冰上融化。
2.  混入質(zhì)粒或連接產(chǎn)物時(shí)應(yīng)輕柔操作。
3.  轉(zhuǎn)化高濃度的質(zhì)粒或高效率的連接產(chǎn)物可相應(yīng)減少終用于涂板的菌量。

4. CMbio 此菌株具有卡那霉素，四環(huán)素抗性，擁有這兩種抗性的質(zhì)粒無(wú)法使用；對(duì) <40 µg/ml氯霉素有抗性，但對(duì)100 µg/ml氯霉素敏感用其他抗生素參考濃度：氨芐青霉素（終濃度： 100 µg/ml），氯霉素（終濃度：100 µg/ml）。
5. SURE感受態(tài)細(xì)胞采用常規(guī)轉(zhuǎn)化方法，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)5×10⁸cfu/μg。 ；如果有更高要求，可嘗試Stratagene公司推薦的標(biāo)準(zhǔn)protocol。