性做久久久久久坡多野结衣-性做久久久久久久久浪潮-性欲影院-性影院-国产精品线路一线路二-国产精品兄妹在线观看麻豆

Coomassie Brilliant Blue G250 考馬斯亮藍G250

產品信息

產品描述

考馬斯亮藍（Coomassie brilliant blue）是兩種相似三苯甲烷染料的總稱，有G250和R250兩種，結構上前者比后者多了2個甲基，命名上 “G”為Green 的縮寫，因G250的藍色染料泛淺綠色；命名上“R”為Red的縮寫，因R250的藍色染料呈微紅色調；“250”表示考馬斯亮藍的純度。生化實驗中常將考馬斯亮藍用于蛋白定量和蛋白電泳中蛋白染色。工作原理是：通過與蛋白質內的氨基和羧基基團間的靜電結合作用以及范德華力，考馬斯亮藍與蛋白質形成強但非共價鍵連接的復合物。蛋白-染料復合物的形成穩定染料攜帶的負電荷陰離子（如磺酸基），從而產生在膜上或者膠上肉眼可見的藍色。

考馬斯亮藍R250（Coomassie brilliant blue R250）更多用于電泳蛋白的染色，染色靈敏度比氨基黑高5倍，可達0.1µg蛋白。R250染色后需要褪色，才能進行蛋白條帶的觀察。

考馬斯亮藍G250的檢測靈敏度雖然較低，但也可替代R250，使用一種快速而簡單的方法進行蛋白染色。因其具有以下特性，即在低于pH 2.0時，溶液無色；pH 7.0時溶液呈深藍黑色；若發生酸化，溶液呈現透明的棕褐色。當G250與蛋白結合，溶液又回到藍色，主要因為蛋白分子周圍具有更偏中性的pH環境。合適條件下，當把膠放在酸化的G250溶液中染色，顯示出藍色的蛋白條帶，背景呈淺琥珀色。此種方法條帶快速顯色，且背景顏色也很淺使得條帶看起來很清楚，則不需要做褪色處理。大部分蛋白用G250檢測的下限是0.5µg。雖然靈敏度降低，取而代之的是操作快速以及方便，比R250染色節省高達11 h。

G250還可通過“Bradford method”用于蛋白質定量。

產品性質

運輸與保存方法

室溫運輸和保存即可。

使用方法

1. 染色步驟（考馬斯亮藍G250 for SDS-PAGE 膠）

1. 電泳完畢后用足量超純水清洗凝膠10-30s 以去除SDS。

1. 將凝膠于50%甲醇，10%醋酸，40%水溶液中固定，水平搖床上低速搖動30min；
2. 去除固定液，更換0.1%考馬斯亮藍G250染色液（0.1% G250 溶于25%甲醇，5%醋酸）*覆蓋住膠，染色30-60min。
3. 染色結束后超純水清洗凝膠，2-3次，每次5min。
4. 于30%甲醇脫色直至蛋白條帶清晰可見。

2．蛋白質定量

1. Bradford 試劑的配制：溶解50mg 考馬斯亮藍G250于50ml甲醇，添加100ml 85%（w/v）的磷酸。 將       上述酸溶液加入850ml水中，并將染液充分溶解（注：不應將水加入酸溶液）。使用前利用Whatman#1濾紙過濾除去沉淀并于4℃避光儲存。
2. 標準檢測步驟（檢測樣品量5-100µg/ml蛋白）

• 稀釋5-8個蛋白標準品（通常是BSA），濃度梯度范圍在5-100µg/ml。
• 稀釋待測樣品（濃度：5-100µg蛋白/30ul）。加入30µl標準品或待測樣品到合適的標記測試管中，并設置兩個空白對照管。其中一個加入30µl水為標準曲線空白管，另一個加入蛋白稀釋液30µl即可。設置2-3個平行。
• 向每管中加入1.5 ml Bradford 試劑并混勻。
• 室溫放置至少5min。吸光值會隨著時間的推移增大，因此樣品在室溫下放置不超過1h；
• 測定OD₅₉₅。

1. 微量分析步驟（＜50µg/ml 蛋白）：

• 準備5個標準品溶液（1ml/管），分別包含0,10,20,30,40,50µg/ml BSA;
• 分別吸取800µl標準液和待測溶液（蛋白濃度＜50µg/ml）于一個潔凈干燥的測試管。設置2-3個平行。
• 向沒管中加入200ul 染色試劑并旋渦處理；
• 以下步驟同標準檢測步驟中d-e。

注意事項

1）0.1%考馬斯亮藍G250染色液配置的過程中，需要先用甲醇溶解G250粉末后，再加入醋酸和水，一般情況下不需要濾紙除雜。溶液可在4度存放6個月，若長時間保存出現沉淀，可用濾紙過濾得到澄清液體。

2）為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

相關產品